真菌片段在肺赛多孢霉病中的传播作用研究

Scedosporium spp. is a common colonizer in patients with chroniclung diseases. In immunocompromised hosts dissemination may occur, often with fataloutcome. Colonisation of cystic fibrosis lungs by different Scedosporium spp. has been demonstrated at a rate as high as 61.5% in our previous study. How Scedosporium reaches the respiratory tract is unclear. The fungal fragments in aerosol had fungal antigens and the potential biological relavance has been established. Thus hypothesis was assumed that the transmission route of Scedosporium spp. could be closely related with fungal fragments in aerosol. Traditional detecting methods targeting only at spores could be insufficient.Three molecular detection methods have been developed and reverse line blot has been applied to clinical specimens. This study aims to expand the current knowledge about the transmission route of Scedosporium spp.. Established molecular detection methods will be used to detect and identify Scedosporium spp. in environments. Aerosol model in vitro will be established and DNA in aerosol will be quantified by real-time PCR. Relationship between DNA and flow rate, vibration rate, moisture, temperature will be revealed.Exploration of the transmission route will be helpful to prevent colonization or infection of Scedosporium spp..

赛多孢霉是慢性肺病患者的常见呼吸道定植菌群，在免疫缺陷人群可引起侵袭性感染，病死率高。我们的前期研究发现囊性纤维化患者的肺部赛多孢霉定植率达61.5％。赛多孢霉如何进入肺中并达到如此高的定植率，目前尚无人知晓。研究发现呼吸道的真菌感染率与真菌片段有关。我们提出假说：赛多孢霉的扩散传播可能与气溶胶中的真菌片段密切相关。传统的检测孢子的方法不能检测到赛多孢霉的真菌片段。我们的前期研究建立了三种分子生物学检测方法，并将基于PCR 的反向线点杂交技术应用于临床标本的检测。本课题拟将前期研究建立的分子生物学方法应用于环境来源的标本，直接检测并鉴定潮湿环境标本中的赛多孢霉DNA，研究其分布情况；建立体外气溶胶模型，采用实时荧光定量PCR技术研究气溶胶中赛多孢霉DNA含量与气流速率、振动频率以及温湿度的关系。对这些问题的阐释有助于了解赛多孢霉的室内气溶胶传播途径，为预防赛多孢霉的定植和感染奠定基础。

赛多孢霉是慢性肺病患者的常见呼吸道定植菌群，在免疫缺陷人群可引起侵袭性感染，病死率高。我们将FTA-DNA 直接提取法成功应用于潮湿环境来源标本，同时对子生物学检测体系进行敏感性和特异性评价和优化，并进一步将基于PCR 的反向线点杂交技术应用于环境来源标本的赛多孢霉属检测，同时研究了光动力疗法对赛多孢霉的体外杀伤效应及其对药敏试验的影响，并对波氏假阿利什霉复合种对4种抗真菌药物的敏感性进行了研究。研究结果发现赛多孢霉以室外环境为主，可能和赛多孢霉喜欢潮湿肮脏的富氮环境有关，也可能和国内赛多孢霉含量低有关。我们将该检测体系的敏感性稳定在5×103 cells/µl和20 pg DNA。我们的研究可以成功从环境标本中提取DNA行采用基于PCR 的反向线点杂交技术，但是标本检出率和传统的培养方法相比还没有显出优势。我们的研究采用不同浓度的亚甲蓝(8, 16, 32 µg/ml)作为光敏剂， 以635 ± 10 nm为波长, 以12 J/cm2的能量密度作用于赛多孢霉标准株，所有的菌株都被光动力不同程度的杀灭，最大达到5.2 log10。我们进一步将光动力和伊曲康唑、伏力康唑、泊沙康唑、两性霉素B的药敏实验相结合，结果显示所有尖端赛多孢霉对伏力康唑、泊沙康唑的MIC值有四倍以上的明显降低，多育赛多孢霉对所有唑类的MIC值有四倍以上的明显降低。我们还对23株分子鉴定为赛多孢霉复合种的菌株检测其对伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑和两性霉素 B 的敏感性，结果发现伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑和两性霉素 B 对波氏假阿利什复合种中不同种的敏感性未见明显差异。该复合种对伏立康唑最敏感，泊沙康唑其次，伊曲康唑变化较大，两性霉素 B 的效果最差。