死亡受体5在C/EBPα诱导肝星状细胞凋亡中的作用及机制

本课题组以往研究表明:与脂肪细胞分化密切相关的C/EBPα在肝星状细胞（HSCs）激活后表达明显降低，体内外转染C/EBPα基因促进激活的HSCs向具有脂滴的静息的HSCs逆转及抑制HSCs增殖实现抗肝纤维化作用。我们的研究也初步证明C/EBPα具有诱导激活的肝星状细胞系（HSCs-T6）凋亡的作用，其机制可能主要通过PPAR-γ和P53上调死亡受体5（DR5）。过表达C/EBPα是否在诱导自然激活的原代培养HSCs及纤维化肝中HSCs的凋亡中起重要作用？如果是，其机制是否主要通过DR5凋亡信号途径、而DR5表达上调是否通过C/EBP同源蛋白（CHOP）途径实现的，是本课题主要研究目的。因此，本研究拟在前二个国家自然科学基金课题研究结果基础上，通过体内外研究回答上述科学问题，以期深入阐明体内外转染C/EBP-α基因诱导激活的HSCs凋亡及抗肝纤维化的作用及机制,为肝纤维化防治提供新的方案。

CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBP-α）是一种核转录因子，它可以调控脂肪细胞的分化。我们前期研究发现C/EBP-α可以在体内外诱导肝星状细胞的凋亡，但是它对肝细胞有何影响尚不清楚。本研究旨在探讨C/EBP-α诱导凋亡的作用在肝星状细胞和肝细胞中是否存在差异。我们构建了腺病毒介导的C/EBP-α基因（Ad-C/EBP-α），用Ad-C/EBP-α分别感染大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）和肝细胞系（BRL-3A）。我们还采用腹腔注射CCl4建立了小鼠的肝纤维化模型。研究结果显示C/EBP-α在体外诱导肝细胞和肝星状细胞凋亡存在显著差异。线粒体途径参与这种C/EBP-α诱导的凋亡作用，而且在T6细胞为主要的凋亡途径。给CCl4诱导肝纤维化的小鼠注射Ad-C/EBP-α，可以减少细胞外基质，包括胶原和羟脯氨酸含量，并且肝损伤指标γ-GT的水平显著下降。取小鼠肝组织做免疫组化和TUNEL分析，结果也显示肝星状细胞凋亡增加，而肝细胞受到较少影响。总之，本研究证实了C/EBP-α在体内外都有诱导肝星状细胞凋亡作用，而对肝细胞没有明显不良影响，这为以后开发高选择性抗肝纤维化药物提供新的靶点依据。. 另外，我们初步证实C/EBP-α蛋白有乙酰化现象。以往只有报道在胰腺癌中C/EBP-α基因存在乙酰化修饰，这是首次发现C/EBP-α蛋白存在乙酰化，我们打算进一步探究C/EBP-α蛋白乙酰化对肝星状细胞的影响及其机制。