dlo-miR167家族在龙眼体胚发生过程中的作用机制研究

microRNA167 family has an important regulatory role in plant embryo development, but its molecule mechanism during somatic embryogenesis in woody plants is still unclear. In this project,using the system of longan somatic embryogenesis, we plan to isolate genes of pri-miR167, its promoter and its target, to carry out the qPCR analyses between miR167 family and its target,to analyses the interaction mechanism of dlo-miR167 family and key target; and further condcut functional checking of dlo-miR167 family, different members of the conversion of longan and Arabidopsis functional identification. Finally,the results which will systematically clarify the expressional and regulatory mechanism between miR167 family and its target during longan somatic embryogenesis, and further provide scientific evidences for regulating the in vivo and in vitro embryogenesis in longan.

microRNA167家族在植物胚胎发育中具有重要调控作用，而其在木本植物体胚中的作用还不清楚。在本项目中，利用龙眼体胚发生系统，分离pri-miR167、启动子及靶标；利用qPCR技术检测miR167家族及其靶标在不同发育阶段的表达情况及其在不同激素和胁迫处理下的胚性愈伤组织中的转录水平；进行dlo-miR167家族与关键靶标互作机制研究；并将miR167家族不同成员转化龙眼和拟南芥进行功能鉴定。以探索dlo-miR167家族及其靶标在龙眼体胚中的互作机制，为揭示龙眼体胚发生的分子机制提供新的线索，并为龙眼胚胎发育的调控提供参考。

miR167通过调控生长素响应因子ARF6/8在植物的营养和生殖生长中起重要作用，但其在植物体胚中的作用尚未明了。本研究中，我们鉴定了miR167家族，分离miR167初级体，启动子和靶标，分析并鉴定其在龙眼体胚中的功能。首先，鉴定了miR167a家族4个可变体和dlo-miR167f 1个成员，它们在子叶形胚大量累积，提示其对子叶形胚的形态建成可能起作用。随后，我们从龙眼胚性愈伤组织中分离了pre-miR167、primiR167和启动子序列。启动子中含光反应顺式作用元件、真菌诱导子响应元件、MeJA响应元件、热激响应元件、低温响应元件、赤霉素响应元件、胚乳表达响应特异元件、干旱诱导响应元件（MBS）、胁迫响应元件、水杨酸响应元件、玉米蛋白代谢调控响应元件、W-box等元件，提示其参与龙眼的胁迫响应。改良RLM-RACE证明龙眼miR167裂解ARF8 mRNA，而却不能裂解ARF6 mRNA。qPCR结果显示，ARF6的表达累积有利于促进龙眼体胚发生，而miR167/ARF8的协调表达对龙眼球形胚的形态建成，及子叶形胚的转换具有重要作用。此外，miR167-ARF6/8在龙眼四季密根中大量表达，提示其功能的保守性。在龙眼愈伤组织中过表达miR167导致龙眼体胚发生延迟，并导致细胞变小，提示其在龙眼体胚中的重要作用。