新型GFP-荧光共振能量转移法研究活细胞中植物钙调素与结合蛋白的相互作用
基本信息
批准号：20475013
项目类别：面上项目
资助金额：22.00
负责人：刘德龙
学科分类：
依托单位：河北师范大学
批准年份：2004
结题年份：2007
起止时间：2005-01-01 - 2007-12-31
项目状态： 已结题
项目参与者：白娟,魏永巨,张素巧,杨莉丽,胡静,曹颖,吴艳环,周晓娟
关键词：
蛋白质相互作用植物钙调素荧光共振能量转移法激绿色荧光蛋白
结项摘要
荧光探针是探测有关转录,翻译及蛋白质命运和相互作用信息的重要方法.本课题利用激光共聚焦显微镜并结合新型GFP-FRET实时观测植物细胞中钙调素CaM与结合蛋白的相互作用。首先研究一种新的FRET 对:采用第三代YFP抗酸型突变体-citrine ，及单体红色荧光蛋白mrfp（荧光发射波长609nm）,Citrine-mrfp的组合解决FRET 中通用的CFP-YFP对的光谱严重干扰问题。同时选择大豆CaM的两种亚型：SCaM1或SCaM4, 及SCaM1的特异性结合肽pepA，植物细胞外CaM结合蛋白-ECBP21，构建含CaM或靶蛋白基因与citrine或mrfp1基因进行重组的质粒，及适合转染植物细胞含35S启动子适合基因枪瞬时表达的PUC质粒。将重组基因在E.COLI中表达与纯化后，进行in vitro FRET分析,利用洋葱表皮细胞的瞬时转染体系进行in vivo FRET 分析.
项目摘要
项目成果
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数据更新时间：2023-05-31
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