miRNA-Foxp3靶向机制在CD4+CD25+Treg介导的肝移植免疫调节中的作用研究

CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg（Treg）介导的免疫调节功能在肝移植免疫耐受诱导和维持中不可或缺，Foxp3是Treg发育和功能的"开关"，最近研究发现，Treg存在靶向Foxp3的miRNA水平的调控。据此我们推测：同种异体肝脏植入后，移植抗原可以诱导受体Treg的miRNA表达谱变化，其中表达上调的miRNA可能通过靶向Foxp3抑制了Treg的免疫调节功能，是急性排斥发生的机制之一。本项目拟运用芯片技术在大鼠肝移植模型中筛选移植抗原诱导的Treg细胞miRNA特异表达谱，并结合我们的生物信息学分析结果，选择作为"功能节点"靶向Foxp3的上游miRNA，进行体内、外功能实验，探讨miRNA对Foxp3表达、Treg表型和功能以及受体的影响，旨在验证"miRNA-Foxp3"靶向机制对Treg介导的肝移植免疫调节功能的抑制作用，为临床防治肝移植排斥反应发掘新靶点和提供新思路。

CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞参与肝移植的免疫调节，在肝移植自然耐受的诱导和维持中具有关键性作用。课题组对大鼠肝移植的模型进行改良，并成功建立了稳定的肝移植急性排斥（Lewis-BN）及自然耐受（BN-Lewis）大鼠模型，并从病理、生化学、生存期方面证明此模型可以良好的模拟临床肝移植免疫耐受及急性排斥反应的生理病理学过程。经过生物信息学预测了大鼠Foxp3作为潜在靶标的上游microRNAs以及结合micro基因芯片分析后，我们得出了作为“功能节点”靶向Foxp3的上游目标miRNA，即miR-484。并通过qRT-PCR实验，证实芯片中上调的目标miR-484与qRT-PCR结果相符。从荧光素酶报告中我们得出在Foxp3上具有miR-484的直接作用位点。体外功能实验中我们通过基因克隆瞬转及siRNA技术，上调或沉默目标上游miR-484后，发现过表达目标miR-484可以使Foxp3表达下调，Treg细胞增殖及活性受到抑制；相反，沉默目标miR-484使Foxp3表达上调，促进Treg细胞增殖及活性。体内功能实验提示表达上调的miR-484通过靶向Foxp3抑制Treg的活化和增值，其所介导的免疫调节加重移植肝脏肝功能受损，是导致急性排斥反应发生的机制之一。这些研究结果显示miR-484靶向作用于Foxp3，对Treg介导的肝移植免疫调节有着重要作用，为临床防治肝移植排斥反应提供新思路。