Leydig干细胞纯化、扩增及雄激素分泌组织构建

雄激素缺乏会导致男性第二性征异常，生理功能紊乱等一系列不良后果，而目前临床上又缺乏理想的治疗措施。应用组织工程技术构建雄激素分泌组织有望提供一种符合生理要求的治疗手段。课题组前期研究证实了Leydig细胞(LCs)构建雄激素分泌组织的可行性，但发现成熟LCs不能增殖，存活时间短，构建组织无法长期维持功能。由于Leydig干细胞（SLCs）具有雄激素分泌潜能和自我更新能力，成为最有前景的雄激素分泌组织构建种子细胞。本项目将针对雄激素分泌组织构建研究中关键的种子细胞来源问题，通过差速贴壁、流式细胞学分析、磁珠分选、条件培养液扩增等方法大规模获得SLCs，建立体外大量富集和扩增SLCs的技术体系，并尝试应用SLCs在同基因大鼠体内构建具有长期(＞12个月)雄激素分泌功能组织的可行性，解决目前雄激素分泌组织构建研究中种子细胞来源不足和功能维持短暂的难题。

目的： 探讨睾丸Leydig干细胞的纯化方法，建立Leydig细胞增殖培养手段，初步探讨BMSCs体外诱导成为Leydig细胞的可行性。方法：1检验不同鼠龄大鼠Leydig细胞不同时间点3β-HSD表达情况，进行细胞亚群分析；2以增殖培养体系促进LCs体外增值培养，进行雄激素分泌组织构建研究；3联合应用差速贴壁法、磁珠分选法分离、纯化SLCs，进行细胞自我更新、增殖、分化能力检测；4 利用LCs与BMSCs共培养诱导BMSCs向LCs分化。结果：1差速贴壁法可获得LCs系各级细胞成分，其中包括SLCs， LCs可在体外增值培养，据有良好的睾酮分泌功能，可成功构建雄激素分泌组织；2，纯化的SLCs可自我更新、增殖、向LCs定向分化；3 BMSCs与LCs体外共培养可表达LCs的一系列表面标志物。结论：细胞增殖培养、干细胞分离纯化以及BMSCs条件诱导均可以成为解决组织工程化雄激素分泌组织研究种子细胞的有效途径。.关键词: 雄激素分泌组织，Leydig细胞，增殖，干细胞，分化