熊果酸改善胰岛素抵抗及其对PPARα/γ受体的双重激动效应研究

我们以中医酸入肝、酸胜甘理论为指导，经临床和实验证实酸味复方具有改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用，并发现熊果酸为主要的活性成分。根据熊果酸的研究资料，我们提出：熊果酸可能同时在PPARα表达的肝脏以及PPARγ表达的脂肪组织发挥协同作用，具有PPARα/γ双重激动效应。本项目根据过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）作用机制，拟构建PPARα和PPARγ的反应元件(PPRE)荧光素酶系统，观察熊果酸对PPARα和PPARγ的激活作用；并采用自发性糖尿病KKAy小鼠和3T3-L1细胞，观察熊果酸对糖脂代谢的作用，研究其对肝脏和脂肪组织中PPARα及PPARγ蛋白和基因表达的影响，以及对胰岛素信号转导通路中关键蛋白胰岛素受体底物1、磷脂酰肌醇3激酶、葡萄糖转运因子4蛋白表达的影响。希望明确熊果酸改善胰岛素抵抗的作用靶点和机制，为印证中医理论对防治胰岛素抵抗与糖尿病的指导作用及药物研发奠定基础。

我们以中医酸入肝、酸胜甘理论为指导，经临床和实验证实酸味复方具有改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用，并发现熊果酸为主要的活性成分。我们构建了PPARα和PPARγ的反应元件（PPRE）荧光素酶系统，发现：（1）熊果酸在2×10-5mol/L～2×10-6mol/L浓度下在体外对PPARγ和PPARα均有一定激动作用，可能是一种PPARα/γ较弱性的双重激动剂；（2）熊果酸改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型脂肪分化的机制可能是通过PPARα/γ激动作用影响其下游信号转导通路，抑制Perilipin磷酸化和提高CAP的表达实现的。熊果酸降低自发型糖尿病KKAy小鼠体重，调节糖、脂代谢，改善胰岛素抵抗，可能通过激活PPARα和PPARγ调节其下游信号转导通路PEPCK、CAP转录和Perilipin的磷酸化，影响FFA、TNF-α、脂联素的表达，IRS-2的磷酸化和GLUT4的转运来实现的；（3）熊果酸改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型糖、脂代谢的作用机制可能是通过激动PPARγ、上调CAP的表达，抑制Perilipin磷酸化而实现的；（4）利用PPARα/γ阻断剂与熊果酸共同干预3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型可减弱熊果酸对CAP，p-Perilipin蛋白表达的影响，故可推断熊果酸通过双重激动PPARs改善胰岛素抵抗。初步明确了熊果酸改善胰岛素抵抗的作用靶点和机制，为印证中医理论对防治胰岛素抵抗与糖尿病的指导作用及药物研发奠定了基础。