TGF-β1基因体内转染联合神经干细胞移植治疗急性脊髓损伤实验研究

脊髓神经元细胞损伤后的再生极其困难，一直是脊柱外科领域中治疗的难题和研究的热点。本课题采用"重物坠击法"构建大鼠急性脊髓损伤（ASCI）的动物模型，通过损伤部位鞘内埋管途径分别将含Lac Z质粒报告基因、脂质体介导TGF-β1基因及经TGF-β1基因转染的神经干细胞注入ASCI大鼠的损伤脊髓组织，建立对照组、实验1组及实验2组。分别于术后不同时期进行神经功能评价、组织病理学检测和TUNEL阳性细胞计数，观察TGF-β1基因及TGF-β1基因转染的神经干细胞移植对损伤脊髓组织的保护作用和对神经元细胞再生的促进作用。进一步应用辣根过氧化酶逆行追踪比较对照组和实验组间脊髓神经元阳性染色细胞的数量和分布，了解两组间轴浆的运输状态。通过测定组织中GDNF表达量的差异结合各组间神经功能评价探讨TGF-β1治疗ASCI的可能机制，为临床应用该基因联合神经干细胞移植治疗ASCI奠定基础。

中枢神经元细胞损伤后的再生与修复极其困难，探索寻找一种既能有效防治脊髓继发性损害发生发展，又能促进中枢神经元细胞再生方法，一直是脊柱外科领域研究的热点与难点。本课题在成功构建大鼠急性脊髓损伤动物模型基础上，通过损伤部位鞘内埋管途径分别将含Lac Z质粒报告基因、脂质体介导TGF-β1基因及经TGF-β1基因转染的神经干细胞注入急性脊髓损伤（ASCI）大鼠的损伤脊髓组织中，分别建立对照组与实验1、2组，分别于术后不同时期进行神经功能评价、组织病理学检测和TUNEL阳性细胞计数，应用辣根过氧化酶逆行追踪比较各组间脊髓神经元阳性染色细胞的数量和分布，测定组织中GDNF表达量的差异探讨TGF-β1治疗ASCI的可能机制。研究结果发现：从胎鼠脑中可成功分离、培养出具有生物活性的神经干细胞，脂质体介导TGF-β1基因体外可成功转染胚胎神经干细胞，通过鞘内埋管方法将TGF-β1基因转染的胚胎神经干细胞注入损伤脊髓组织后，免疫组织化学方法及电镜均观察到大鼠目标脊髓组织中的存活移植细胞，术后神经功能评价、组织病理学检测、辣根过氧化酶逆行追踪及TUNEL阳性细胞计数结果表明对照组、实验1组及实验2组各实验指标差异具有统计学意义，实验组脊髓组织的GDNF表达量较对照组升高。研究结果表明TGF-β1基因及TGF-β1基因转染的神经干细胞移植对损伤脊髓组织具有一定的保护作用，对神经元细胞再生具有一定的促进作用，其可能机制是通过提高损伤脊髓组织内的GDNF表达量发挥作用，为TGF-β1基因联合神经干细胞移植治疗急性脊髓损伤提供了可靠的实验室依据。