FGFR1在NFATc1通路异常致胚胎心内膜细胞凋亡增殖紊乱中的作用及机制

前期研究发现1）心脏发育中的细胞凋亡调控紊乱是先天性心脏病的重要发病机制之一；2）NFATc1敲除小鼠的心内膜垫区域凋亡增强、主肺动脉瓣膜内皮细胞增殖能力缺乏；3）FGFR1在NFATc1敲除小鼠心脏中表达下调；4）生物信息学分析发现FGFR1内含子区存在NFATc1作用位点并通过荧光素酶法初步证实。因此我们推测在心脏发育中，FGFR1是NFATc1的下游作用分子。本研究在前期研究的基础上，拟分离并培养小鼠胚胎心内膜细胞（ECC），应用EMSA方法确定受NFATc1作用的FGFR1内含子区域；应用抑制剂、激活剂和基因过表达、沉默表达等方法，探讨FGFR1在Calcineurin/NFATc1通路中的重要作用及其对ECC增殖凋亡的调控；从而揭示NFATc1敲除导致心脏缺陷的分子机制，为先天性瓣膜病及心脏分隔缺陷的发病机制提供新的线索和理论依据；为先天性心脏病的基因治疗提供新的靶点。

Calcineurin/NFATc1 信号通路参与了胚胎心内膜细胞的转录调控，但其下游信号分子仍不明确。通过前期研究，我们推测FGFR1可能是受其调控的下游分子。本研究通过小鼠胚胎心内膜细胞（ECC）原代培养及凝胶迁移实验（EMSA）、基因过表达、基因沉默表达等分子生物学技术，探讨FGFR1在Calcineurin/NFATc1 信号通路调控胚胎心内膜细胞增殖、凋亡中的作用。结果发现：1）小鼠FGFR1 内含子区域存在NFATc1的作用位点；2）应用抑制剂抑制ECC 细胞Calcineurin/NFATc1 通路后，FGFR1核酸及蛋白水平受调控表达下调, ECC增殖受到抑制，凋亡增加；应用激活剂激活ECC 细胞Calcineurin/NFATc1 通路后，FGFR1表达上调； ECC增殖增加，凋亡受到抑制；3）Calcineurin/NFATc1通路被抑制引起的ECC细胞增殖凋亡变化可以通过过表达FGFR1所纠正；4）FGFR1表达沉默后，ECC细胞增殖受到抑制,凋亡增加；而用Calcineurin/NFATc1通路激活剂不能解除FGFR1表达沉默对ECC增殖凋亡的影响。研究提示在胚胎心内膜细胞中，FGFR1是受Calcineurin/NFATc1通路调控的下游分子，Calcineurin/NFATc1通路通过调控FGFR1的表达而影响胚胎心内膜细胞的增殖和凋亡。