用基因整合平台系统在丝状蓝藻中高效表达外源基因研究

人工合成了人源胸腺素α基因（hTα1）编码区。用PCR扩增出蓝藻Calothrix sp.PCC Tb01的cpcB2A2基因DNA片段和Synechococcus sp.PCC7942的isiAB基因DNA片段。构建了分别以cpcB2A2和isiAB为整靶位、含有外源基因nptII和hTα1的两种蓝藻基因定位整合系统的供体质粒pPC218-T和pZL-T。hTα1上游组装了红光诱导或热诱导的启动子。用化学转化法和电穿孔转化法获得了由供体质粒转化的Km蓝藻克隆子，经过子杂交证实nptII基因和hTα1基因已定位整合在受体细胞染色体上。并经测定，外源基因nptII能在受体细胞内有效表达。蓝藻基因定位整合系统的建立解决了不一般质粒载体转化蓝藻常出现不稳定的问题，并且可以利用此系统由光合自养型原核生物生产系列具高经济效益的基因产物。