基于活体成像技术的补气活血药配伍抗卵巢癌转移时效关系研究

中医临床肿瘤用药中，活血化瘀药占有重要地位。然而，基于细胞及分子生物学的研究结果，质疑其是否会导致肿瘤扩散或转移。申请者根据古今大量临床资料及长期相关性研究积累，提出：补气活血药配伍同用，不仅能消除活血化瘀药尤其破血药可能带来的负面效应，而且又能协同增效。而依照中医辨证施治及因时制宜原则，肿瘤发生发展过程中，适时运用补气活血药是治疗取效及延缓转移的关键。本课题选用肿瘤治疗代表性的补气活血药对莪术与黄芪，利用绿色荧光蛋白卵巢癌原位移植整体动物模型，在活体成像系统下全程动态跟踪二者不同剂量配伍后，对卵巢癌生长、转移的影响及手术后的效应改变，深入探讨其对卵巢癌作用的最佳时期和时效关系。同时利用分子生物学技术，检测microRNA等表观遗传学改变，进一步探讨补气活血药配伍使用对卵巢癌转移作用的分子机制。为丰富和发展中药配伍理论，指导临床安全合理用药提供科学依据。

本课题选用肿瘤治疗代表性的补气活血药对莪术与黄芪，利用红色荧光蛋白卵巢癌原位移植整体动物模型，在活体成像系统下全程动态跟踪二者不同剂量配伍后，对卵巢癌生长、转移的影响，深入探讨其对卵巢癌作用的最佳时期和时效关系。研究内容包括建立和完善荧光卵巢癌原位移植瘤模型，对其肿瘤的生物学特性进行比较研究；参照卵巢癌临床分期及中医对肿瘤早、中、晚期的界定，根据肿瘤组织的病理检查和活体成像观察结果，首次将HO-8910卵巢癌原位移植瘤分为三期(I期，邪气亢盛，正气未虚；II期邪气仍盛，正气已虚；III期，邪气大盛，正气虚极)；通过黄芪、莪术单味药及配伍作用于卵巢癌原位移植瘤三个时期动物模型，观察肿瘤抑制率的差异，探寻最佳给药时间；采用免疫组化方法检测HO-8910卵巢癌原位移植瘤组织中与肿瘤浸润、转移相关因子（MMP2、VEGF、FGF2、BCL2、COX2等）蛋白的表达；采用Real time-PCR检测裸鼠HO-8910卵巢癌原位移植瘤MMP2、Bcl2、FGF2基因的表达。实验研究表明：（1）黄芪、莪术单味药及配伍在卵巢癌发病初期（I期）抑瘤效果最为明显，且配伍组（高剂量）效果优于阳性药组及单味药组，统计学有差异（P＜0.05），免疫组化检测各给药组与阴性对照组相比对MMP2、VEGF、FGF2、COX2蛋白表达有明显抑制作用，且配伍组较单味药组抑制作用明显，统计学有差异（P＜0.05）。由此表明补气活血药配伍抗肿瘤能够协同增效，符合中药配伍理论。（2）当卵巢癌发展到II期、III期，给药组抑瘤效果虽然不显著，但是对肿瘤的转移具有一定的抑制作用。此外，我们发现在肿瘤发展到II期时，莪术组肿瘤转移数量及部位多于阴性药组，提示本期应慎重单纯使用活血化瘀药特别是作用峻猛的破血药，而与补气药配伍原则可能避免。（3）肿瘤三期RT-PCR实验结果表明：在卵巢癌发展的各期，给药组肿瘤组织中MMP2 mRNA、Bcl2 mRNA、FGF2mRNA含量均低于阴性对照组，统计学有差异（P＜0.05），表明无论是顺铂还是中药特别是补气药，活血药及补气活血药均能降低肿瘤转移几率，抑制转移相关因子。本课题的研究为丰富和发展中药配伍理论，指导临床安全合理用药提供一定的科学依据。