脓毒症免疫抑制状态下CD4+T细胞基因组活性功能元件的鉴定及功能研究

T cells immune response, mainly CD4+ T cells, is suppressed in sepsis after overwhelming inflammatory cell activation and inflammatory mediator release.Such kind of immune suppression is related with unmanageable secondary infection and later deaths. Functional DNA elements activation or silencing induced by stimulus are important mechanisms for different cells status or cell functional subsets. Mapping active functional elements is important in understanding the effect of environment stimulus on cells. DNase I hypersensitive sites can be used as land markers of active functional elements. In this study we will identify DHS in different CD4+T subsets and mapping active functional elements around the whole genome under sepsis situation. And then we will using qRT-PCR,ChIP,reporter assay and bioinformatics approaches to study function of those DHS sites and their role in immune suppression in sepsis. Our study will provide information on the influence of sepsis environment stimulus on CD4+ T cells, and may be helpful to understanding the mechanism of sepsis induced immune suppression.

脓毒症后T细胞受炎症过度激活而处于免疫抑制状态，且主要以CD4+T细胞异常为主。这一现象与脓毒症后难治性感染及患者后期死亡密切相关，其机制值得研究。基因组上特定DNA功能元件的活化或沉默是使细胞处于不同功能状态的重要原因。鉴定活性功能元件（active functional elements）是全面了解环境对细胞影响的关键步骤。DNA发挥功能时所处区域变得开放，对DNA酶高度敏感，称为DHS位点。后者直接反映基因组活性功能区域，可作为标志物反映活化的基因或功能元件。本研究拟鉴定脓毒症不同阶段CD4+T细胞基因组上DHS位点发生的变化，绘制活性功能位点的全基因组分布图谱，然后结合生物信息学和基因组学分析，通过定量PCR、ChIP、报告基因等手段研究这些功能位点改变的功能意义，以期较系统了解脓毒症环境对CD4+T细胞基因组活性功能元件的影响。研究结果将有助于深入了解脓毒症免疫抑制机制。

脓毒症后T细胞受炎症过度激活而处于免疫抑制状态，且主要以CD4+T细胞异常为主。这一现象与脓毒症后难治性感染及患者后期死亡密切相关，其机制值得研究。基因组上特定DNA功能元件的活化或沉默是使细胞处于不同功能状态的重要原因。鉴定活性功能元件是全面了解环境对细胞影响的关键步骤。DHS位点直接反映基因组活性功能区域，可作为标志物反映活化的基因或功能元件。本研究通过鉴定不同CD4+T细胞基因组上DHS位点发生的变化，绘制活性功能位点的全基因组分布图谱，然后结合生物信息学和基因组学分析，通过定量PCR、ChIP、报告基因等手段对部分DHS位点的功能进行了探讨。进一步利用单细胞测序技术结合DHS位点分析，发现免疫抑制性T细胞某个亚群显著增加，更易于向Treg分化，其活化后TGF-β2分子表达水平显著升高。开放染色质位点分析提示TGF-beta2可能受转录因子LEF1调节。本项目研究结果将有助于深入了解T细胞的功能特点，研究结果也将有助于深入理解免疫低下的机制。