基于hMRGPRX2靶点的中药注射剂类过敏反应刺激物快速筛选方法研究

The safety for the clinical use of TCM injections has been criticized due to the incidence of adverse reactions increased year by year, and has become an urgent need of scientific problems. Among these adverse reactions, incidence of anaphylactoid reaction are much higher than type Ⅰ hypersensitivity reaction. HMRGPRX2 is a key target for causing anaphylactoid reaction discovered recently, so find the stimuli causing hMRGPRX2-mediated anaphylactoid reaction and elucidate the interaction relations is of great significance to reduction of TCM injections allergic reaction and improving clinical use safety. On the basis of previous research, we plan to build a high expression hMRGPRX2 cell membrane chromatography model, combine with the HPLC/MS to establish an online two-dimensional chromatography analysis method to fast "recognition, analysis and identification" stimuli causing anaphylactoid reaction in TCM injections; Using hMRGPRX2 cell membrane chromatography model, combining with radio-ligand binding and competitive displacement experiment, frontier and thermodynamic analysis and pharmacological experiments in vitro, preliminary clarify the allergic molecular mechanism and interaction relationship between hMRGPRX2 and stimuli. This study will establish a new method for rapid, accurate and high throughput screening stimuli causing anaphylactoid reaction and sensitization mechanism research model, provide experimental basis and theoretical basis for safety clinical use of TCM injections.

中药注射剂临床使用安全性因逐年增高的不良反应发生率而备受社会质疑，已成为亟需解决的科学问题，且其不良反应中类过敏反应发生率远高于Ⅰ型过敏反应。hMRGPRX2是近期发现的致类过敏反应关键作用靶点，发现以该受体为作用靶点的类过敏反应刺激物并阐明其相互作用关系，对减少中药注射剂类过敏反应、提高临床使用安全性具有重要意义。本课题在前期研究的基础上，拟建立高表达hMRGPRX2细胞膜色谱模型并联用HPLC/MS成为二维色谱在线分析方法，快速“识别-分析-鉴定”中药注射剂中类过敏反应刺激物；利用hMRGPRX2细胞膜色谱模型，结合放射性配体结合与竞争置换实验、前沿与热力学分析及体外药理实验，初步阐明类过敏反应刺激物与hMRGPRX2之间的相互作用关系及致类过敏分子机理。本课题将建立新的快速、准确、高通量的致类过敏成分筛选方法和致敏机制研究模型，为中药注射剂临床安全使用提供实验基础和理论依据。

中药注射液是在中药制剂基础上发展起来的新剂型，代表了中医药的特色。由于中药物质基础的复杂性和多样性以及市场规模的不断增大，中药不良反应越来越受到大众的关注。相关研究人员提出了相应的中药注射液生物检定和生物评价的模型和方法，但是由于分析方法不具有普遍性，尚不能保证中药注射液的安全。亟需更加灵敏、快速的中药注射液分析方法，保证中药注射液的有效和安全。本研究选择临床应用量大、不良反应报道多的中药注射液为研究对象，以二维液相色谱为研究手段，建立快速进样环中心切割二维液相色谱方法，应用于中药注射液中致敏成分以及生物活性成分的定量分析；同时建立了高表达建立hMRGPRX2-HEK293/CMC与HPLC-ESI-MS/MS在线联用系统，用于筛选中药注射液等复杂样品中的微量类过敏组分，并进行相应的体内外药理验证；最后，创新性的建立基于喷墨技术的分散液-液微萃取联合超高效液相色谱-质谱联用方法，应用于复杂样品中微量及痕量成分的含量测定。在本项目的资助下，三年内共计发表 SCI 论文3 篇，第一标注3篇（其中JCR1区论文1篇，IF=6.04），申请专利3项；培养博士研究生1名，硕士研究生3名，尚有1名博士研究生在读。该项目的完成为中药注射液临床安全使用提供实验依据，同时建立中药注射液类过敏反应刺激物筛选新方法，提供快速、准确、高通量的致敏成分检测手段和致敏机制研究模型；在微量分析方面的创新性研究结果，将为中药注射液的发展提供理论支持和研究方法参考，也为中药制剂质量标准的提升以及现代化和国际化提供新的研究思路。