HRZ三联抗痨药及TGF-β1siRNA脂质体纳米微粒的构建及体内体外实验研究

The first line anti-tubercular drugs with HRZ are hard to maintain long-term retention and effective drug concentration in the main area of vertebral sclerosis and tuberculosis in the kitchen wrapped.Addition,anti-tuberculosis for a long time, drug side effects, poor compliance, supervision difficulties and poor anti-TB action of host cells are all the main reasons for the delayed healing and recurrence of tuberculosis. Therefore, it is very useful and significant to develop a new form of highly active anti-tubercular drugs, to improve their biodistribution in vertebral, to improve the cure rate of spinal tuberculosis and effect of chemotherapy. In this study, we use of self-assembly properties of liposome to carry HRZ and co-delivery of TGF-β1 siRNA. After the formation of a stable liposomes,we analyze the physical properties, chemical properties, characterization and effective of TGF-β1 siRNA targeted gene silencing of the nanoparticles. We also do the in vivo and in vitro study of anti-tubercular efficacy by evaluation on macrophages and rabbit model of spinal tuberculosis. The purpose of this study is to obtain sustained-release, low toxicity, targeted well, easy supervision, and no drug resistance nanoparticles. The novel synthetic targeting liposomes represent an efficacy of spinal tuberculosis,increase the concentration of anti-tubercular drugs in spinal tuberculosis lesions, and also provide a theoretical basis for the potential treatment of TB gene therapy.

以HRZ为基础的抗痨主药在椎体硬化区及其所包裹的结核病灶内很难长期存留及维持有效的药物浓度，抗痨时间长、毒副作用大、顺应性差、督导困难以及宿主细胞抗结核能力差等都是结核迁延不愈和复发的主要原因。因此，开发新剂型高效抗痨药物，改善其在病椎的生物分布，对提高脊柱结核的治愈率、化疗疗效的提供意义重大。本研究拟利用脂质体形成的自组装特性载HRZ并通过与TGF-β1 siRNA结合，形成稳定的脂质体纳米微粒，分析该纳米微粒理化特性、表征及TGF-β1 siRNA靶向基因沉默作用，并在巨噬细胞及兔脊柱结核模型上进行安全性及体内、体外抗结核疗效评价，以期获得缓释、低毒、靶向、易于督导、不易耐药的新型抗结核纳米微粒，为提高脊柱结核疗效、增加病灶区抗结核药物浓度及脊柱结核的基因治疗提供理论基础。

以HRZ为基础的抗痨主药在椎体硬化区及其所包裹的结核病灶内很难长期存留及维持有效的药物浓度，抗痨时间长、毒副作用大、顺应性差、督导困难以及宿主细胞抗结核能力差等都是结核迁延不愈和复发的主要原因。因此，开发新剂型高效抗痨药物，改善其在病椎的生物分布，对提高脊柱结核的治愈率、化疗疗效的提供意义重大。.本研究结果显示如下：.1、利用脂质体形成的自组装特性载异烟肼、利福平和吡嗪酰胺（HRZ）并通过与TGF-β1 siRNA结合，形成稳定的HRZ三联抗结核药/TGF-β1 siRNA，结果发现异烟肼、利福平及吡嗪酰胺包封率分别为 90%、88%、37%，纳米脂质体呈球形，大小均匀，粒径为（152.69±59.47）nm，表明成功构建纳米脂质体。.2、分析纳米脂质体对体外人巨噬细胞的细胞毒性作用及机制，结果发现该纳米脂质体在一定浓度范围内抑制巨噬细胞增殖，使细胞周期被捕获于G2期，且显著抑制巨噬细胞靶基因TGF-β1的表达，表明其具有明显的靶基因沉默作用，细胞毒性在合格范围内，是一种有应用潜力的生物材料；.3、在BCG感染的人巨噬细胞上进行体外抗结核疗效评价，结果发现模型组（BCG感染的巨噬细胞模型）Ag85A和TGF-β1的mRNA及蛋白量表达与空白组（单纯巨噬细胞培养）相比明显上调，对照组（BCG感染的巨噬细胞与HRZ三联抗结核药纳米脂质体共培养）中Ag85A和TGF-β1的mRNA及蛋白表达与模型组相比明显下调，实验组3种不同浓度（35mg/ml、40mg/ml、50mg/ml）HRZ三联抗结核药/TGF-β1 siRNA纳米脂质体处理后，Ag85A和TGF-β1的mRNA及蛋白表达与对照组相比进一步下调，表明该纳米脂质体对体外BCG感染的人巨噬细胞具有明显的下调Ag85A基因表达作用及TGF-β1基因沉默作用；.4、在兔脊柱结核模型上进行安全性及体内抗结核疗效评价，结果发现纳米脂质体在兔脊柱结核模型中能够促进结核病灶的治愈、毒副作用小、疗效显著，研究表明纳米脂质体在兔脊柱结核模型中的具有抗结核作用。.本研究取得了预期的阶段性成果，获得了缓释、低毒、靶向、易于督导、不易耐药的新型抗结核纳米脂质体，为提高脊柱结核疗效、增加病灶区抗结核药浓度及脊柱结核的基因治疗提供理论基础，使患者缩短疗程、早日康复，具有重要的社会意义。