TCL1单链TCR基因修饰T细胞特异性杀伤B细胞淋巴瘤的研究

Traditional chemotherapy can temporarily induce complete remission in the majority of patients with B-cell lymphomas, but relapse remains the difficulty of clinical management. In the preliminary study, we first discovered the T-cell leukemia/lymphoma antigen 1 (TCL1) specifically and highly expressed in a variety of B-cell lymphomas. TCL1 stimulated cytotoxic T cells that can specifically target B-cell lymphomas but not normal B cells. Here we propose to clone TCL1-specific wilde-type and mutant single-chain T-cell receptor (scTCR). The expression of scTCR in normal T cells and the binding affinity of scTCR with the peptide/MHC will be analyzed in vitro. The specific recognition of antigen by scTCR will be tested in vitro. After that, the scTCR-transduced T cells will be tested for cytokines secretion and cytotoxicity against B-cell lymphomas in vitro. Finally, the cytotixic scTCR-transduced T cells will be adoptively transferred in vivo to test the ability to lyse the B-cell lymphomas. Successful completion of this project will help acquire TCL1 specific scTCR and elucidate the mechanism of specific cytotoxicity mediated by scTCR.

传统的化疗可使大多数B细胞淋巴瘤患者暂时缓解，但复发仍是临床治疗的难点。前期研究中，我们首先发现T细胞白血病/淋巴瘤抗原1(TCL1)在多种B细胞淋巴瘤中特异性高表达，而TCL1介导的细胞毒性T细胞可以靶向杀死B细胞淋巴瘤而对正常B细胞无影响。本项目将克隆TCL1特异性野生型和变异型单链T细胞受体(scTCR)，检测scTCR在正常T细胞中的表达以及和多肽/MHC分子的结合力；检测scTCR介导T细胞对抗原特异性的识别；检测被scTCR基因修饰T细胞的细胞因子释放情况以及对淋巴瘤的细胞毒反应；具有杀伤功能的scTCR基因修饰T细胞过续性转导入小鼠体内观察T细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤作用。从而获得TCL1特异性scTCR，阐明scTCR介导T细胞杀伤B淋巴瘤细胞的机制。

B细胞淋巴瘤是目前世界上最常见的非霍奇金淋巴瘤，大部分的B细胞淋巴瘤病人经过规范的化疗，放疗和抗体治疗可以达到治愈的标准，1/3的病人会发展成为难治性淋巴瘤。我们前期研究发现T细胞白血病/淋巴瘤抗原1(TCL1)在多种B细胞淋巴瘤中特异性高表达，针对TCL1T细胞表位的细胞毒性T细胞（CTL）可以靶向杀死B细胞淋巴瘤而对正常B细胞无影响。在此项目中，我们率先开展TCL1表位特异性TCR基因修饰T细胞抗B细胞淋巴瘤的研究。①利用有限稀释方法，我们获得数个针对TCL1T细胞表位的T细胞单克隆（T clones）；②从T细胞单克隆（T clones）中成功获得了特异性TCR的全长序列，包括TCR alpha和beta链；③利用慢病毒技术，成功将TCL1表位特异性TCR转导入正常T细胞中，实验结果显示表位特异性TCR经过转导后可以在T细胞上表达，特异性识别T细胞表位和杀伤淋巴瘤细胞；④在体外成功构建TCL1单链TCR(scTCR)载体,测序结果显示正确；⑤在免疫缺陷小鼠体内实验中，TCL1表位特异性TCR基因修饰T细胞可以介导T细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤，延长小鼠的生存时间；⑥发现了一种敲除内源性TCR alpha和beta链,抑制TCR错配的gRNA/CRISPR/cas9的方法。项目初步探讨了TCL1表位特异性TCR-T免疫细胞治疗B细胞淋巴瘤的作用，发表SCI文章8篇，会议文摘2篇，申请国家专利2项。