IL-35对D-GalN致敏小鼠LPS诱导的肝损伤的保护作用及其机制研究

Lipopolysaccharide (LPS) induced liver injury is one of the most common mechanism of liver damage, which is closely related to sepsis induced hepatic failure. The activation of kupffer cells (KCs) plays a critical role in the process of LPS induced liver injury. Interleukin-35 (IL-35) is a novel cytokine with important regulatory function, which is protective in models of autoimmune related diseases. However, the relationship between IL-35 and innate immunity as well as immune response to infection and the role of IL-35 in organ injury protection are not clear. The signaling transduction pathway of IL-35 also remains unknown. Our previous results showed that IL-35 could regulate the function of macrophages. KCs are the largest population of macrophages. Therefore, in the model of LPS induced liver injury in D-GalN sensitized mice, the regulatory effect of IL-35 on KCs, the protective effect against LPS induced liver injury and the signaling transduction of IL-35 will be investigated in this project, by means of the supplement of exogenous recombinant protein and the detection of endogenous expression of IL-35. This project would help to further study the biological effect of IL-35 and its mechanism. It would also be useful in the immune therapy for liver injury caused by sepsis and so on.

内毒素（LPS）诱导的肝损伤是最为常见的肝脏损伤机制之一，与脓毒症所致肝衰竭密切相关，肝枯否氏细胞（KCs）的激活在其发病中起到重要作用。白介素-35(IL-35)作为一种新型细胞因子，具有重要的免疫调节功能，在多种自身免疫相关性疾病模型中起到保护作用，但IL-35与天然免疫、感染免疫的关系及其在器官损伤防护中的作用尚不清楚，IL-35作用的信号转导途径也未被阐明。我们前期结果提示IL-35能参与对巨噬细胞功能的调节，而KCs是体内最大的巨噬细胞群。因而，本研究拟通过D-GalN致敏小鼠LPS诱导的肝损伤模型，以外源性给予和内源性检测两方面手段，研究IL-35能否对KCs的功能发挥调节作用，观察IL-35对LPS诱导的肝损伤是否具有保护作用，并在此基础上探讨IL-35作用的信号转导途径。本课题有望进一步揭示IL-35的生物学作用和作用机理，并为脓毒症等因素所致肝损伤的免疫调理治疗提供方向。

白细胞介素-35（IL-35）作为一种新型抗炎细胞因子，其生物学作用以及临床意义越来越受到免疫学研究者和临床工作者的重视，目前认为其主要通过诱导和促进调节性T 细胞以及调节性B细胞来达到抑制炎症的作用，并在多种自身免疫性疾病模型中起到治疗作用。而IL-35在感染免疫以及非特异性免疫中的作用研究较少，特别是在脓毒症以及多器官功能障碍中的研究更为缺乏。. 在本项目中，我们观察了IL-35对LPS诱导的急性肝损伤是否具有保护作用并探讨其作用是否与肝枯否细胞有关。再者，在体外检测IL-35是否对肝枯否细胞具有免疫调节作用及其对肝实质细胞的影响，并在此基础上探索IL-35作用的分子机制。最后，我们对大面积烧伤脓毒症患者IL-35水平及其与脓毒症生物标记物IL-6、PCT的关系进行了相关性分析。. 通过研究，我们得出如下结果：IL-35可剂量依赖性地抑制D-GalN/LPS 诱导的肝损伤，减轻细胞凋亡，并明显抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6产生，促进抑炎细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β的产生。IL-35对LPS肝损伤的该保护作用主要通过枯否细胞实现。IL-35可抑制LPS刺激下枯否细胞对肝细胞的杀伤性，该作用与其抑制枯否细胞的NO、TNF-α，促进IL-10产生有关。IL-35的该肝保护作用主要由抑制枯否细胞产生的IL-10所介导并可能与其激活枯否细胞STAT1、STAT3蛋白有关。此外，临床数据分析提示，大面积烧伤脓毒症患者血清IL-6/IL-35与PCT水平呈明显正相关，并且与患者感染严重程度相一致。. 本研究从整体动物水平、细胞水平以及分子水平三个层次观察IL-35对内毒素诱导的肝损伤中的保护作用以及机制，并进一步了解了IL-35作用的靶细胞和作用机制，对IL-35在感染免疫中的生物学作用作了更为深入的研究。并且，通过临床对大面积烧伤脓毒症患者的检测分析提示IL-35可能作为脓毒症治疗的新靶点以及脓毒症的新型生物标记物之一。本研究有望为脓毒症、多器官功能障碍综合征，以及多种因素引起的肝损伤和肝衰竭的免疫调理治疗提供重要参考依据。