长链非编码RNA编码来源的小肽与血压调节及其机制研究

Long noncoding RNAs (lncRNAs) have been considered as a group of transcripts with base number greater than 200bp and no protein-coding ability. However, recent studies of small peptides can be encoded from open reading frame (ORF) of lncRNAs have been reported, which attract more attention to this field. In previous studies, we found a potential small peptide, sORF4, from a long noncoding RNA known to regulate blood pressure. Compared with normal mice, sORF4 knockout mice showed increased blood pressure, decreased relaxant and contractile response of the two branches of the superior mesenteric artery. These preliminary results suggest that sORF4 may contribute to a blood pressure reduction through regulating blood vessel contractile and relaxant ability. The aim of this project is to further confirm the coding capacity and blood pressure reduction induced by sORF4; its physiological and molecular mechanism, as well as the potential to develop as an antihypertensive peptide. It is hoped that this project can help us find an antihypertensive peptide and provide a new view for the treatment of hypertension.

长非编码RNAs（lncRNAs）以前一直被认为是一类碱基数大于200bp且没有编码蛋白质能力的转录本，但是随着研究的深入，现在关于在lncRNA开放阅读框区（ORF）编码小肽的文献争相被报道，小肽编码正成为lncRNA研究领域的热点。在前期研究中，我们从一条已知与血压调节相关的长链非编码RNA中找到了一种可能具有编码蛋白潜力的小肽sORF4。与正常小鼠相比，sORF4基因敲除鼠的血压从7周开始有升高，敲除鼠肠系膜上动脉的二级分支的舒张力和收缩力均比正常鼠降低，提示sORF4可能通过影响血管舒张力降低血压。本课题想进一步确认这条序列编码的是小肽，此肽能降低血压，并探讨sORF4改变血管收缩舒张力生理机制和分子作用机制及开发为临床降压肽的潜力。希望通过本课题可以找到一个能降低血压的长链非编码RNA编码的小肽，它的作用方式及治疗作用，从而为高血压疾病的治疗提供一种新的可能性。

长非编码RNAs（lncRNAs）以前一直被认为是一类碱基数大于200bp且没有编码蛋白质能力的转录本，但是随着研究的深入，现在关于在lncRNA开放阅读框区（ORF）编码小肽的文献争相被报道，小肽编码正成为lncRNA研究领域的热点。在研究中，我们从一条已知与血压调节相关的长链非编码RNA中找到了一种可能具有编码蛋白潜力的小肽sORF4。在给突变了GFP没有绿色荧光的的序列前加上sORF4序列后，能产生绿色荧光，且把sORF4构建到带有Flag标签的质粒后，通过western-blot检测到预计的分子量大小处出现条带，提示sORF4能编码小肽。我们构建质粒基因表达载体pcDNA3.1，转染293A细胞，蛋白裂解液裂解细胞，跑SDA-PAGE胶，一抗孵育Flag抗体,NC为阴性对照，ORF-Flag、5’UTR-ORF-Flag、5’UTR-ORFmut-Flag为实验组, 结果显示ORF4可能编码小肽。293A细胞转染Flag-His标签质粒，36h蛋白裂解液裂解细胞，分别用His标签抗体和peptide定制抗体做Western blot，结果显示标签蛋白及ORF4编码的peptide有表达。免疫荧光结果显示His-tag的peptide初步定位于细胞质。我们构建了sORF4基因敲除鼠，通过尾套测血压的方法，观察到与正常小鼠相比，sORF4基因敲除鼠从7周开始血压有升高。同时，将小鼠的肠系膜上动脉的二级分支分离，检测血管的收缩力、舒张力时，观察到sORF4基因敲除鼠血管舒张力和收缩力均降低。以上结果提示sORF4可能通过影响血管舒张力降低血压。本课题确认这条序列编码的是能降低血压的小肽，并探讨sORF4改变血管收缩舒张力生理机制。本研究力争为高血压疾病的治疗提供一种新的可能性。