盐藻烯醇酶基因的功能鉴定及其在甘油补偿途径中的作用研究

盐藻是一种典型的嗜盐单细胞生物，甘油的合成是其主要的耐盐策略。在高渗震动下淀粉通过糖酵解途径生成甘油来平衡外界的渗透压是研究较深入的途径。但发现在失活该途径中的关键酶（如GPDH）后，仍有甘油的合成来参与渗透调节的修复，预示着甘油补偿途径的存在。我们的前期实验发现，在高渗震动下，糖生成途径的关键酶基因烯醇酶基因有明显的差异表达，表明糖生成途径可能是甘油生成的一条补偿途径。本项目拟将对盐藻的甘油补偿途径作全面研究：首先将已克隆的烯醇酶基因作细胞定位，确定其同功酶类型；将该基因作原核表达，提纯蛋白质，作酶动力学实验，确定其催化功能；再转化酵母GPP缺陷菌株（不能从糖酵解途径生成甘油，同时也阻断了甘油与脂代谢的联系），在高渗震动下检测甘油的合成情况，同时采用同位素示踪技术确定在高渗状态下糖生成途径是否为甘油合成的补偿途径，阐明烯醇酶基因在耐盐过程中的作用；进一步阐明盐藻的耐盐机制。