药用昆虫九香虫抗胃癌活性成分分离鉴定及抗癌机理研究

Malignant tumor is a major public health problem in the world, which is an incontrollable proliferation and death disorder disease, the mechanism of controlling cancer cell apoptosis disorder plays an important role in developing of a cancer. The key point of prevention of a cancer is suppresses cancer cell proliferation and accelerates the apotosis. A number of chemotherapy agents have offered significant advantages in the treatment of cancer.However, the effects of these drugs are often considered ineffective or excessively toxic. Therefore, highly effective and lowly toxic drugs are urgently required. Aspongopus chinensis Dallas has been used as a traditional Chinese medicine，which has good clinical grounding in anti-tumor in China. However, The effective components and anticancer mechanism remain unclear. How to find out its effective components and molecular biology mechanism and apply it correctly to the treatment of malignant tumor for perfect clinical effect is what we should do. The present study are based on the laboratorial result anciently, aims to isolate and purify antineoplastic components from Aspongopus chinensis Dallas. The mechanism of antitumor activity and the molecular mechanism on apoptosis of tumor cells are also investigated, for the purpose of providing a timely scientific basis for the exploitation of highly effective and lowly toxic drugs.

恶性肿瘤是危害人类健康的难题,它是一种细胞增殖与死亡障碍性疾病，肿瘤细胞凋亡的调控机制失常在恶性肿瘤的演进过程中起重要作用。肿瘤防治的关键手段之一就是抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡。虽然目前的抗肿瘤药物对大多数肿瘤有一定疗效，但仍存在着严重的副作用。因此，寻找高效、低毒的抗肿瘤药物仍是当前肿瘤治疗的当务之急。九香虫是一味传统中药，具有确切的中医抗肿瘤临床基础，然而其药性成份和作用机制不明。如何从分子生物学的角度进一步认识其药用成分、作用机理，从而能更合理地应用九香虫治疗癌症并取得理想的临床效果是我们应该努力研究的一个方向。本项目旨在以往实验基础上，进一步分离纯化九香虫抗肿瘤成分，并探讨其抗肿瘤药理机制,为开发高效、低毒的抗肿瘤药物提供实验基础。

恶性肿瘤是危害人类健康的难题，肿瘤防治的关键手段之一是抑制肿瘤细胞的增殖和促进其凋亡。虽然目前的抗肿瘤药物对大多数肿瘤有一定疗效，但仍存在着严重的副作用。因此，寻找高效、低毒的抗肿瘤药物是当前肿瘤治疗的当务之急。九香虫是一味传统中药，具有确切的抗肿瘤临床基础，然而其药理活性成份和作用机制尚不明确。. 本项目在国家自然科学基金委的资助下，对九香虫血淋巴的抗癌活性、功能蛋白分离纯化及抗癌机制进行了系统研究，具体结果如下：. 1、抗癌活性测定：采用台盼蓝染色法、CCK-8法进行体外抗癌活性检测，倒置显微镜观察细胞形态学变化，Hoechst 33258检测细胞凋亡，流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果显示，九香虫提取物对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823细胞的体外增殖均有抑制作用，且在浓度为10，20，30，40 mg/L时呈时间和浓度依赖性。. 2、功能蛋白分离纯化：采用(NH4)2SO4沉淀、超滤、Sephadex G-50凝胶过滤层析、FPLC Resource Q离子交换色谱、C8柱反相高效液相色谱、C18柱反相高效液相色谱等方法从九香虫体内首次分离得到具有抗胃癌活性多肽，并明确其工艺流程。. 3、抗癌机制研究：采用荧光定量PCR与Western blot检测经九香虫提取物处理的SGC-7901、MCF-7细胞Caspase-3、Caspase-9、Bax基因在mRNA及蛋白水平的表达，发现较对照组细胞表达明显上调（P<0.05）)，Bcl-2基因较对照组细胞表达明显下调（P<0.05）；表明九香虫血淋巴提取物可能通过触发SGC-7901、MCF-7细胞内源性凋亡通路使其发生不可逆的凋亡，从而实现抑制肿瘤细胞的增殖和促进其凋亡。. 本项目从抑制癌细胞增殖与诱导细胞凋亡的角度探讨九香虫血淋巴抗癌细胞的药理机制，并追踪分离获得九香虫抗肿瘤活性多肽，从mRNA及蛋白水平分析了九香虫提取物作用于肿瘤细胞后相关基因表达，初步明确了其抗肿瘤机制，有利于九香虫的进一步开发利用，为开发安全、有效、拥有自主知识产权的抗肿瘤新药提供依据和材料，同时本研究也可为其他药用昆虫资源的研究和开发提供参考。