从提取环节控制中药注射剂大分子杂质的方法学研究

The safety problems of traditional Chinese medicine injection (TCMI) are associated with macromolecular impurities they contained. These were proved by our previous studies, because TCMI free of macromolecular substances became much safer than the origin one but also shared almost the same pharmacological efficacy. The main aim of the project is to limit macromolecular impurities at the beginning stage of TCMI preparation when their extracts are made, in order to facilitate macromolecular impurity removal. Three TCMIs (Danshen Injection, Honghua Injection, and Qingkailing Injection) are introduced as three examples in the project. Their macromolecular impurities, including lipopolysaccharides, proteins, condensed tannins, nucleic acids, resins and polysaccharides, will be limited by different methods referred to medicinal materials preprocessing, extraction temperature, dissolved oxygen and feed-intake time, under the condition that their active ingredients are fully extracted. The optimal methods will be integrated to produce the three TCMIs according to the licensed standards, and the macromolecular impurities and active ingredients in them, as well as their main pharmacological effects will be investigated. The results will provide common technical supports for optimizing TCMI extraction conditions, and further for improving TCMI quality.

我们的前期研究证实中药注射剂的安全性问题与所含的大分子杂质有关，去除大分子物质能提高中药注射剂的安全性并保障其有效性。为了减少中药注射剂制备后期的去大分子杂质压力，本项目以丹参注射液、红花注射液和清开灵注射液三种中药注射剂为例，探索在提取阶段减少大分子杂质（脂多糖、蛋白质、缩合鞣质、核酸、树脂和多糖）摄入并确保其活性成分和活性的中间体制备方法，内容包括药材预处理、提取温度，溶解氧和投料时间。最后将最佳条件进行组合试制这三种中药注射剂，探讨组合条件对中药注射剂大分子杂质和活性的综合影响，为优化中药注射剂提取方法提供共性技术支持，推动中药注射剂生产工艺的改进和质量提高。

中药注射剂的用药安全性牵动着整个中医药界的神经。对于中药注射剂安全性问题的产生原因众说纷纭。段为钢课题组根据中药注射剂安全性问题的特点，从物质基础的角度系统地提出“中药注射剂大分子物质”理论。该理论的主要内容有：中药注射剂含有的大分子物质进入机体会导致（类）过敏反应从而导致用药安全性；一般而言，中药注射剂中的大分子物质无药效贡献，属于杂质。.在该理论的指导下，本研究对中药注射大分子杂质的来源进一步进行了分析。认为中药注射剂的大分子杂质主要来自生产环节，药材则是主要来源（另一来源可能是制剂用辅料）。而药材来源的大分子杂质可能药材表面的污染和药材释放的原生代谢物（包括核酸、蛋白质、缩合鞣质、树脂、多糖等）。.本研究以单方红花（地上部分药材）、丹参（地下部分药材）和清开灵（复方）的注射液为研究对象，采用宏基因组、分子筛、冷冻干燥、HPLC指纹图谱和动物实验证实：1）中药注射剂用的药材存在较严重的潜在污染。总体上，地上部分比地下部分污染严重，真菌污染比细菌污染严重；2）短暂洗涤可以在不影响中药材活性物质溶出的前提下可以去除大部分污染性大分子物质；3）通过优化提取条件，可以实现中药活性成分的“选择性”溶出，即：优先溶出小分子，减少大分子溶出和形成。该优化条件是：先将药材短暂洗涤，溶媒先加热后再投料,采用临界沸腾温度（即温度与回流一样，但不沸腾）；4）通过试制的中药注射剂表明，优化工艺条件可以保证中药注射剂的主要疗效无明显变化，但安全性改善。.在中药注射剂安全性原因研究争论纷纭的背景下，该研究为中药注射剂的生产工艺的优化提供了技术参考，值得中药注射剂生产企业借鉴。下一步将以共性辅料注射用聚山梨酯80入手，研究辅料大分子杂质对中药注射剂安全性的影响，并从中医理论的角度研究中药注射剂大分子物质导致安全性的机理。