早期生长反应基因1调控RNAi效应链选择偏好性作用的研究

RNAi作为一种新型的基因表达封闭技术，已被广泛应用于基因功能研究和基因治疗研究。而RNAi应用中存在的"脱靶"效应严重限制了其进一步临床应用，其根本原因在于RNAi作用的关键步骤RISC组成时效应链的选择及装载机制仍不祥。我们前期研究表明，哺乳动物细胞内部分siRNA双链均有潜力引起与之互补靶基因的降解，提示RNAi效应链选择过程中有未知因素参与调控。近期，课题组利用免疫共沉淀技术首次发现早期生长反应基因1（Egr-1）可与RISC核心组分TRBP相结合，同时发现Egr-1可显著增强外源转染miRNA的转录后抑制效果，并显著增加成熟miRNA链掺入到活性RISC的效率，本项目拟在上述研究工作基础上，对Egr-1参与调控RISC组装过程中效应链选择偏好性的机制进行探索，有望发现RISC组分的新成员并阐明其调控组装的新机制，为避免RNAi非特异性效应、合理设计RNAi应用药物提供理论依据。

RNAi作为一种新型的基因表达封闭技术，已被广泛应用于基因功能研究和基因治疗研究。而RNAi应用中存在的“脱靶”效应严重限制了其进一步临床应用，其根本原因在于RNAi作用的关键步骤RISC组成时效应链的选择及装载机制仍不祥。本课题对调控RISC组成时效应链选择的因素进行了探索，结果发现早期生长反应基因1（Egr-1）可调节部分miRNA/siRNA效应链装载入RISC复合体的效率，且这种作用与miRNA/siRNA热力学稳定性参数相关；我们发现Egr-1可通过与TRBP结合调节内源性miR-125a-3p的生成及其靶向干扰效果；并且TRBP的97~227aa区域介导了Egr-1对miR-125a-3p靶向干扰效果的调控。该研究明确Egr-1为调控RNAi作用的重要因子，为阐明RISC组装过程中效应链选择偏好性机制提供新的理论依据。