p27出核转运磷酸化通路异常致人卵巢癌恶性增殖的机制

细胞周期重要负性调控因子p27的功能异常与多种肿瘤发生密切相关，近年研究提示p27出核胞浆分布与肿瘤恶性进展有关，p27第10位丝氨酸(S10)的磷酸化是其出核转运依赖关键步骤。我们前期研究证实在临床切除的卵巢癌标本中S10磷酸化的p27（pS10p27）与卵巢癌分化程度、转移有关，推测p27S10可能成为新的治疗靶点；本研究进一步构建p27S10突变（达到去磷酸化或拟磷酸化）的卵巢癌稳定株，在细胞和裸鼠移植瘤模型中分析突变对p27功能、定位及卵巢癌增殖的影响；针对Ser10磷酸化通路相关分子CRM1、JAB1 设计靶向cy3-siRNA，干预细胞及移植瘤模型中的表达，分析与p27突变体相互作用的分子机制及对移植瘤生长及移植瘤细胞增殖、凋亡的影响。阐明p27出核转运相关通路在卵巢癌恶性增殖中的机制及与预后关系，为进一步揭示卵巢癌发病的分子机制、设计合理的靶向治疗位点及判断预后提供实验依据。

细胞周期重要调控因子p27的功能异常与多种肿瘤发生密切相关，p27的表达主要通过转录后修饰调控，其中p27的磷酸化发挥主要作用。p27第10位丝氨酸（Ser10）是p27主要的磷酸化位点，该位点的磷酸化也是CRM1介导的p27出核转运降解的关键步骤。JAB1（接头蛋白）与Ser10磷酸化的p27（pS10p27）结合后，被CRM1（出核蛋白）识别，继发后续的出核转运。为进一步证明p27出核转运磷酸化通路异常导致卵巢癌发生的具体机制，我们聚焦卵巢癌细胞增殖过程中Ser10磷酸化的p27（pS10p27）和相关通路分子CRM1、JAB1的表达和功能变化。研究结果显示：（1）在临床切除的卵巢癌石蜡标本中，pS10p27和CRM1、JAB1与卵巢癌的分级分期有关，其表达在III期肿瘤中明显升高，并与患者的不良预后相关；（2）在卵巢癌细胞中，Ser10的磷酸化是p27出核的重要步骤，而CRM1、JAB1作为接头蛋白可以促进p27的蛋白水解。JAB1在细胞中过表达，可导致p27的出核转运以及与CDK2/Cyclin复合物的分离。阻断p27 Ser10的磷酸化（S10A），CRM1与p27的结合降低，p27在细胞核中积聚；促进p27 Ser10的磷酸化（拟磷酸化突变S10D），p27与CRM1的结合增加，p27的胞浆分布增加；（3）在卵巢癌SKOV3细胞中以及裸鼠移植瘤动物模型中，卵巢癌细胞的增殖过程涉及CRM1参与的p27 Ser10磷酸化出核降解通路，抑制p27 Ser10的磷酸化和CRM1的表达可降低卵巢癌细胞的增殖。研究结果揭示了p27出核转运相关通路在卵巢癌恶性增殖中的机制及与预后关系，为进一步揭示卵巢癌发病的分子机制、设计合理的靶向治疗位点及判断预后提供了实验依据。