通络治痹法调控类风湿关节炎滑膜血管新生以抑制软骨破坏的研究

There are the synovial abnormal metabolism,angiogenesis in rheumatoid arthritis(RA),which will lead to bone destruction ultimately,and angiogenesis is the important intermediate process.Angeogenesis is related with collateral disease of chinese medicine.Preliminary work showed that Tongluozhibi method had effects on the angilgenic factors.In this study，these works will be doned as followed (1) duplicating the collagen-induced arthritis(CIA) rat model, magnetic resonance imaging(MRI) and magnetic resonance spectroscopy (MRS) willed be used to observe the changes of angiogenesis and bone destruction dynamically from the points of energy metabolism and imaging destuction;The molecular biology methods be used to study the relevant cytokines and signaling pathways changes；Meanwhile ,Wenjingtongluo method will be used to study the regulating effects on the synovial angiogenesis and cartilage destruction to find the biological effects of evidence; (2) the rat joints fibroblast-like synovial cell of collagen-induced arthritis will be uesd in vitro to study the regulating effects of Wenjingtongluo Method on the angiogenesis fators. Purpose to find the regulating effects of Wenjingtongluo method on RA from the points of angiogenesis and cartilage destruction.

类风湿关节炎（RA）早期即存在滑膜异常代谢、血管新生，最终致骨破坏，呈动态的相关变化,血管新生是其中重要的中间过程。血管新生与中医络病相关。前期工作表明，以温经通络法治疗RA，对血管生成因子有干预作用。基于前期工作，本研究开展以下工作：（1）体内研究：复制胶原诱导关节炎（CIA）大鼠模型，在病变早期应用磁共振波谱及成像方法，从能量代谢及影像学角度动态观察类风湿关节炎滑膜血管新生及软骨破坏的动态变化，并用分子生物学手段，分析相关细胞因子及信号通路的动态改变；基于温经通络法，以芍药甘草附子汤加味为干预手段，研究其调控RA滑膜血管新生，从而抑制软骨破坏的生物学依据；（2）体外研究：CIA大鼠关节成纤维样滑膜细胞为研究对象，以中药血清学方法，研究温经通络法对血管新生相关因子的调控作用。目的 从RA早期病理生理变化-血管新生为切入点，研究温经通络法调控滑膜血管新生从而抑制软骨破坏作用。

本课题以“络病”理论为指导，以温经通络治痹为法，以血管新生为切入点，应用分子生物学、磁共振成像等手段，从“促”与“抑”血管生成两方面的变化以及骨破坏的相关动态变化等进行研究。在复制胶原诱导性关节炎( collagen induced arthritis ，CIA) 大鼠模型同时，给予中药复方芍甘附子汤干预，分别在造模后28天（RA早期）、56天（晚期）天进行以下研究：RA滑膜血管的形态学动态变化观察、关节影像学（X线、MRI）测定，及包括HIF-VEGF-ANG轴、JAK/STAT信号通路、Ras-Raf-MEK-ERK信号通路、G蛋白-AC-cAMP通路在内的促血管生成相关因子及相关信号通路的动态改变；体外实验主要以中药血清学方法，应用成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）进行HIF-VEGF-ANG轴、抑血管生成因子及骨破坏相关因子的测定，研究温经通络法调控血管新生的作用机制。.研究发现，芍甘附子汤能明显抑制CIA大鼠关节炎症、减轻关节病理损害程度，延缓影像学进展，降低CIA大鼠血清中VEGF及其可溶性受体sVEGFR-2水平，下调滑膜组织HIF-1α、Ang-1、Ang-2 、VEGF、VEGFR-2蛋白及mRNA表达，上调滑膜组织血管生成抑制因子ES、AS蛋白表达水平；有效调控JAK/STAT信号通路相关mRNA的表达和Ras-Raf-MEK-ERK信号通路蛋白表达实现抗炎效应；上调OPG表达，降低RANKL、RANKL/OPG表达水平，对CIA大鼠模型骨破坏有保护作用；体外细胞实验发现，芍甘附子汤能降低HFLS-RA细胞上清液及细胞内HIF-1α、Ang-1、Ang-2水平和mRNA的表达，并呈剂量依赖性，下调RANKL的mRNA相对表达量。提示以芍甘附子汤为代表的温经通络治痹法，可能通过促/抑血管生成相关因子网络和相关信号通路，以及关节软骨动态变化的影响，干预类风湿关节炎早期血管新生及软骨的破坏，为类风湿关节炎早期干预手段提供应用依据。