探索MAPK14 (p38MAPK alpha) 蛋白激酶在卵母细胞中的功能

卵母细胞的健康状况是决定女性生殖能力的关键因素。在体外实验中，p38蛋白激酶被多个研究团体表明对卵巢颗粒细胞和卵丘细胞-卵母细胞复合体有影响。本人的前期研究工作表明在次级生长卵泡中开始特异性的在颗粒细胞中敲除P38MAPK蛋白激酶并不影响其后来的发育及雌鼠的生育能力。p38MAPK在卵母细胞发育的特定时期也被激活，但其具体作用并不为人知。通过杂交携带p38MAPK flox 等位基因的小鼠和携带Gdf9-cre的小鼠，本人建立了p38MAPK在卵母细胞中特异敲除的小鼠株。初步观察表明该小鼠生育能力受到极大影响。本研究希望在确认其生育能力受影响的基础上，阐明其内在的分子机制，揭示p38MAPK蛋白激酶在卵母细胞中的功能。本研究将有助于人们了解卵母细胞发育成熟的分子过程，为人类不育问题的诊断提供新的靶目标。

本课题对p38α在突变小鼠模型中和大鼠模型中的功能做了初步的研究。发现突变小鼠组（p38αf/f;Gdf9-Cre）的生育能力有显著降低；突变小鼠组（p38αf/f;Gdf9-Cre）的超排能力不受影响；突变小鼠组（p38αf/f;Gdf9-Cre）胚胎着床率显著降低；正常大鼠卵母细胞中存在着p38α、p-p38α和p-mk2蛋白的表达，而且p38α、p-p38α和p-mk2蛋白在大鼠卵泡发育过程中有着时间和空间特异性；p38α蛋白在各年龄段大鼠不同级别卵泡颗粒细胞中均有表达，在窦状卵泡中表达最高；p-p38α蛋白在各年龄段大鼠不同级别的颗粒细胞中也均有表达，在次级卵泡中表达最高；p-mk2蛋白在各年龄段大鼠不同级别的颗粒细胞中也均有表达，在始基卵泡表达最高，且以后随着卵泡的发育，p-mk2表达强度逐渐减弱；P38α蛋白在不同年龄段大鼠不同级别卵泡的卵母细胞中均有表达，在次级卵泡中表达最高；p-p38α蛋白在不同年龄段大鼠不同级别卵泡的卵母细胞中均有表达，在次级卵泡中表达同样也最高；p-mk2在不同年龄段大鼠不同级别卵泡的卵母细胞中均有表达，在始基卵泡中表达最高，在次级卵泡中表达最低；不同年龄大鼠颗粒细胞中的P38α在12天表达最高；颗粒细胞中的p-p38α在16天表达最高，20天表达最低；p-mk2蛋白在颗粒细胞表达在4天最高，到16天达到第二次高峰，20天表达最低；发现在大鼠卵巢各级卵泡的卵母细胞中p38α和p-p38α表达有一致性；在不同鼠龄的卵泡发育过程中，大鼠的颗粒细胞中的p-p38α和p-mk2表达有一致性。以上这些结果提示p38α可能在不同的物种中有不同的生物学功能，进一步研究p38α在人的生殖系统中的功能很有必要，且具有非常重要的意义。