CCAAT增强子结合蛋白-δ（CEBPD）通过MAPK通路对角质形成细胞的影响及紫草素的干预作用

Shikonin is one of the main components of lithospermum erythrorhizon which traditional medicine could treat psoriasis effectively. The target and development have always been the focus of our research. In a previous study, we found that CCAAT/enhancer-binding proteins-δ(CEBPD) is a critical factor by PCR Array. It’s down-expressed in psoriatic epidermis both in human and psoriasis-like mice model. Meanwhile, in the vivo, we found that shikonin oil could cure the psoriatic lesion of mouse. On the strength of previous study, we hypothesize that CEBPD would be a significant target in the development of keratinocytes proliferate and shikonin would cure psoriasis by means of CEBPD. In this study, we will figure out the role of CEBPD in psoriasis’s treatment by shikonin from a series of experiments. For instance the clinical observation、cell molecular research、the study of signal transduction pathways regulation mechanism and establish an psoriasis-like mice model by CEBPD knocked out. In vitro and vivo to explored the regulation mechanism of CEBPD in the keratinocytes via MAPK pathway and the intervention of shikonin. This project may be extremely valuable to define a novel target for the treatment of psoriasis.

“紫草素”是有效治疗银屑病的传统中药紫草的提取物，其作用靶点和机制一直是我们研究的焦点。前期实验中我们发现，IL-17刺激HaCaT细胞的过度增殖可被紫草素抑制。应用PCR Array技术定位出用药前后差异性表达的基因——CCAAT增强子结合蛋白δ（CEBPD）在银屑病动物模型及患者组织标本中的表达明显减少。并且，将紫草素配制成紫草素油外用于银屑病小鼠模型皮损处可对皮损有良好的治疗作用。据此我们得到两个提示：1）CEBPD在银屑病的发生、发展中扮演较重要角色。2）CEBPD可能是紫草素抑制角质形成细胞过度增殖的作用靶点。在后续研究中我们拟通过临床组织观察、蛋白表型检测、信号通路调控探索、转基因鼠体内实验佐证等一系列研究，部分阐明CEBPD在角质形成细胞过度增殖和银屑病发病中所扮演的角色及紫草素的干预机制。为临床上中药治疗银屑病等皮肤病或自身免疫性疾病提供更可靠的理论及实验依据。

CCAAT增强子结合蛋白δ（CEBPD）是一种无内含子基因，编码属于CEBP家族的269个氨基酸的蛋白质，被认为参与细胞分化，代谢和免疫应答反应的转录因子。CEBPs诱导APR基因结合并合成产物,诱导NF-κB和STAT3调节的CEBPB和CEBPD的合成，CEBPD已被证明在角质形成细胞分化的末期具有重要作用。 “紫草素”是有效治疗银屑病的传统中药紫草的提取物，前期实验中我们发现，IL-17刺激HaCaT细胞的过度增殖可被紫草素抑制，应用PCRArray技术定位出用药前后差异性表达的基因—CCAAT增强子结合蛋白δ（CEBPD）在银屑病动物模型及患者组织标本中的表达明显减少。并且，将紫草素配制成紫草素油外用于银屑病小鼠模型皮损处可对皮损有良好的治疗作用。据此我们得到提示： CEBPD在银屑病的发生、发展中扮演较重要角色，CEBPD可能是紫草素抑制角质形成细胞过度增殖的作用靶点。在本研究中我们拟通过临床组织观察、蛋白表型检测、信号通路调控探索等研究，部分阐明CEBPD在角质形成细胞过度增殖和银屑病发病中所扮演的角色及紫草素的干预机制。研究结果表明：1、IL-17诱导STAT3激活并通过下调CEBPD使角质细胞过度增殖，该作用可被紫草素明显抑制。2、紫草素通过抑制角质形成细胞的增殖和诱导细胞凋亡起到治疗银屑病的作用，该过程与JAK/STAT3通路相关。3、JAK/STAT3途径的激活诱导HaCaT细胞和咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型中CEBPD蛋白表达的下调。4、紫草素可以逆转JAK/STAT3活化的作用，提示CEBPD可能是银屑病潜在的治疗靶点。5、紫草素可促进外周血中NaïveCD4+T细胞向iTreg细胞的分化。6、紫草素可通过抑制AKT及P70S6K蛋白的磷酸化从而促进iTreg细胞的分化.。7、紫草素增强iTreg细胞对于效应性T细胞的抑制功能及促进IL-10、TGF-β1的分泌。8、紫草素通过灌胃给药方式能有效地治疗银屑病样皮炎小鼠，且能够通过体内诱导方式促进脾脏内iTreg细胞的分化及相关因子的分泌，并同时明显地抑制皮损内Foxp3蛋白的表达。本研究可能为临床上中药治疗银屑病等皮肤病或自身免疫性疾病提供理论及实验基础。