SIRT1去乙酰化酶抑制剂及RNA干扰逆转顺铂耐药卵巢癌细胞耐药的机制研究

对顺铂（DDP）耐药机理探讨和逆转DDP耐药是目前卵巢癌综合治疗研究的热点。沉默信息调节因子2－相关酶类（sirtuins，SIRT）是最近发现的依赖NAD+的第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶，通过对组蛋白、转录因子去乙酰化来调节基因的表达，与P53蛋白密切关联。基于SIRT1基因高表达于卵巢癌细胞，本研究选用顺铂耐药卵巢癌细胞株为研究对象，采用SIRT1 RNAi干扰后观察耐药细胞的p53下游目的基因、多药耐药基因和凋亡相关基因的表达变化，同时探明DDP诱导的DNA损伤后组蛋白去乙酰化酶抑制剂（EX-527）逆转卵巢癌耐药的机制。并收集临床卵巢癌病例检测SIRT1表达情况，探讨卵巢癌患者SIRT1表达与化疗反应性和生存因素间的关联。通过在卵巢癌尤其是耐药细胞研究SIRT1基因，为探索卵巢癌细胞耐药机制和临床治疗提供新的思路，达到提高卵巢癌患者生存率的目的。

1：卵巢癌细胞SIRT1和Acetyl-P53K382表达及其相关性与治疗预后意义的评价-103例卵巢组织(65例上皮性卵巢癌、12例交界性肿瘤、17例良性肿瘤和9例正常卵巢组织)SIRT1和Acetyl-P53K382表达及65例卵巢癌进行了预后评价。结果：SIRT1和Acetyl-P53K382在卵巢组织中均有表达；交界性肿瘤、例良性肿瘤和正常卵巢组织仅显示阴性或弱阳性表达，而在上皮性卵巢癌中SIRT1阳性表达为70%, Acetyl-P53K382阳性表达为24%；在NACT卵巢癌组织中SIRT1与Acetyl-P53K382呈负相关; 2）单因素分析显示，SIRT1高表达与PFS(无进展生存期)相关P=0.005，与OS(总生存期)无明显相关性;Acetyl-P53K382低表达明显与OS明显相关。COX比列风险/多因素分析显示，SIRT在PFS OS中均无意义; Acetyl-P53K382在PFS和OS中均有意义；Acetyl-P53K382的表达是PFS和OS一个独立影响因素，Acetyl-P53K382表达越高，患者预后较好。2.抑制SIRT1和SET7/9活性增加P53+/+卵巢癌细胞的CDDP敏感性-抑制SIRT1酶活性及其甲基化可上调Acetyl-P53K382和BAX的表达和使核内Methyl-SIRT1/Acetyl-P53K382复合物Acetyl-P53K382以及核浆转位并介导细胞凋亡；甲基化抑制剂SAH联合EX527对SIRT1高表达的A2780CIS细胞的作用较强；抑制SIRT1和SET7/9酶活性并不能明显增加A2780和A2780CIS细胞对CDDP的敏感性，这可能与P53四聚体结构域突变有关； 3.卵巢癌组织P53乙酰化位点突变K351N的PCR检测及治疗预后评价-已建立了一个特异性和敏感性高的P53K351N点突变的实时荧光定量PCR方法；103例卵巢组织中65例检出NACT3例（9.7%，3/31）;卵巢癌P53K351N点突变可能是导致后续治疗耐受和预后差的原因之一；由于病例数相对较少和卵巢癌组织中卵巢癌细胞DNA富集技术的限制，导致NACT组和减瘤术+化疗组在统计学上无显著差异。我们将进一步完善P53K351N点突变检测技术并扩大病例数进行前瞻性筛查研究，有可能对卵巢癌临床治疗方案的选择具有重要意义。