调节性T细胞在促进混合嵌合体形成，诱导小肠移植耐受过程中作用机制的研究

小肠移植是治疗终末期肠功能衰竭最有效的手段，但受困于移植术后复杂的排斥反应以及缺血再灌注损伤（IRI），小肠移植的研究发展缓慢。最新研究证实，基于CD4+CD25+Treg的治疗方案不仅能有效控制急、慢性排斥反应，而且能有效保护移植物减轻IRI，并对GVHR也有积极的负调节作用。在理论上具有众多优势的Treg似乎理应有效治疗小肠移植排斥，但迄今为止，还未见成功的报道。前期工作中我们发现单独运用供体特异性扩增的CD4+CD25+Treg（DSTreg）虽不足以完全控制小肠移植术后的排斥反应，但却能在低剂量射线条件下，协同供体骨髓细胞植入（BMT），形成混合嵌合体，并获得移植皮片的长期存活。于是我们设想通过DSTreg + BMT的诱导方式，在小肠移植模型中建立稳定的混合嵌合体，从而促进移植肠的长期存活，甚至形成小肠移植耐受，深入探索Treg在此过程中扮演的角色，为临床实践提供有力的实验证据。

第一部分.本研究按照标书研究计划完成了相关内容：（1）建立稳定、高效的DSTreg离体扩增体系。（2）证实DSTreg高效的抗排斥功能，在异基因小鼠体内通过DSTreg + 骨髓移植预处理方案建立混合嵌合体，并诱导了异基因皮片移植耐受。（3）并建立了小肠移植急性排斥反应模型，为后续分子机制研究打下了坚实基础。.第二部分.Wip1是新发现的在中性粒细胞发育和成熟过程中重要磷酸酶之一。在现有的研究中，我们使用中性粒细胞参与介导损伤的模型—小肠缺血再灌注模型，来研究粒细胞在氧化应激以及炎症环境下的作用。运用Wip1基因敲除鼠构建肠道缺血再灌注模型，我们发现肠道损伤明显加重，粒细胞浸润也明显增加，此外，趋化因子例如CXCL-2，CXCL-1以及CCL-2和炎性细胞因子例如TNF-α和IL-17A表达也明显上调。通过构建骨髓完全嵌合体，我们发现Wip1基因内源性调控免疫细胞來介导肠道缺血再灌注损伤。通过过继输注不同基因敲除鼠（WT，IL-17A，Wip1和Wip1/IL-17A 双基因敲除）骨髓中的粒细胞给IL-17A基因敲除小鼠，我们进一步发现Wip1基因敲除鼠的粒细胞与WT小鼠的粒细胞相比，主要通过分泌更多的IL-17A，来介导肠道缺血再灌注损伤。因此，我们的研究表明：Wip1在肠道缺血再灌注损伤过程中，也能内源性地负调控粒细胞炎性功能。