民族药四方藤抗炎有效成分的分离、活性筛选及作用机制研究

Cissus Pteroclada Hayata is one of the characteristic nature medicinal plants belonging to the family of Cissus Linn.of Vitaceae, which is widely distributed in south China such as Guangxi, Yunnan province. As a traditional anti-inflammatory drug, it is used to treat rheumatic diseases, duodenal hemorrhage, gastritis etc. in Chinese folk with nice curative effects. In this project, a series of chromatography and spectrum methods are applied to separate and identify the chemical constituents from the effective fractions of Cissus Pteroclada Hayata monitored by LPS-stimulated macrophage and oxidative stress model in vitro based on anti-inflammatory and anti-oxidant activity. This study aims to indentify the anti-inflammatory constituents of Cissus Pteroclada Hayata, especially those with both nice anti-inflammatory and anti-oxidant activities. For the compounds which possess excellent anti-inflammatory effect, pharmacological means such as ELISA, RT-PCR,Western Blot will be applied to explore their possible anti-inflammatory mechanisms at the molecular and cellular level. In a word, the task of this research is to explore the chemical constituents of Cissus Pteroclada Hayata through extraction, separation and structural characterization, as well as their pharmarcological activites and the possible mechanisms. This research may provide theoretical and experimental data for further exploiting Cissus Pteroclada Hayata.

四方藤是广西、云南等少数民族地区用于风湿痹痛、十二指肠出血、胃炎等炎症相关疾病治疗及外伤止血的民间常用植物药，其来源丰富、价格低廉、疗效广泛而显著。本项目以抗炎、抗氧化等药理活性筛选为指导，利用脂多糖（LPS）刺激巨噬细胞建立体外炎症模型和细胞氧化应激等方法，以各种层析、波谱等现代提取分离和结构测试手段确定四方藤有效部位的化学成分，明确其有效的抗炎组分，筛选出兼具有良好抗氧化和抗炎活性的成分；对于筛选到的药效显著、具有良好发展前景的化合物，应用酶联免疫吸附、RT-PCR、Western blot等分子生物学和药理学的研究手段，在细胞和分子水平上探讨化合物发挥抗炎活性的可能机理。通过四方藤化学成分的提取分离、结构鉴定、活性筛选和作用机制的研究，为民族药四方藤的深度研究与开发利用提供理论依据和实验指导。

本项目采用药效学和植物化学相结合的方法，明确了民族药四方藤乙醇提取物的乙酸乙酯、正丁醇和水溶性部位为其活性部位，运用各种现代分离和结构表征技术从四方藤的活性部位分离鉴定了35个化合物的结构，发现了4个新化合物，并对其中的多糖类组分进行了较为系统的研究，明确了四方藤有效部位的化学成分。通过对四方藤的各组分进行抗炎、抗氧化、抗黑色素生成等药理活性筛选，筛选出其中具有良好抗炎、抗氧化、抗黑色素生成的物质，确立了四方藤发挥药理活性的主要物质基础。对于药效优越具有良好发展前景的化合物，运用了ELISA、Western blot等分子生物学和药理学的研究手段，探索了他们发挥抗炎、抗黑色素生成等药理活性的可能作用机理。开发了一套从四方藤中提取原料药—岩白菜素的实用提取工艺，该工艺具有高效、廉价、易于产业化放大等优点。通过四方藤化学成分的系统分离、药理活性筛选、作用机制研究，为民族药四方藤的深度研究与开发利用奠定了良好的理论与实验依据。项目已完成了原申请书中预定的研究内容，并在此基础上有所拓展；已在国家核心期刊以上杂志发表论文5篇，其中影响因子2.0以上的SCI收录期刊2篇；在全国性学术会议论文集上发表会议论文2篇；申请国家发明专利1项；另外尚有3篇论文投国内外专业期刊，在审稿中，部分研究结果尚待整理于后期发表。在人才培养上，项目培养硕士研究生3名，均已获硕士学位；项目负责人和项目组成员经过此项目的开展在科研能力等方面得到了较大程度的提高。