小胶质细胞P2Y6受体与帕金森病发病的相关性研究

免疫细胞表面嘌呤能受体P2Y6的改变已被证明与IL-8的释放、免疫活性细胞的趋化和吞噬增强及免疫炎症损伤密切相关。我们在帕金森病患者外周血单核细胞中检测到P2Y6受体mRNA水平增高，并初步证明小胶质细胞P2Y6受体的改变与MIP-2（小鼠中IL-8的同源细胞因子）的产生和分泌有关，提示小胶质细胞中P2Y6受体的异常改变可能和帕金森病的发病有关。在此工作基础上，我们将扩大样本量，证实帕金森病患者外周血单核细胞的P2Y6受体水平确有改变；同时通过体内、外实验观察P2Y6受体的改变是否与小胶质细胞功能的改变、多巴胺能神经元的损伤相关，从而明确P2Y6受体异常改变在小胶质细胞介导的多巴胺能神经元损伤中所起的作用。课题的开展将为探讨P2Y6受体作为帕金森病新生物学标记物和潜在治疗靶点的可能性提供理论和实验依据。

目的 探讨脂多糖（LPS）刺激下小胶质细胞表面膜嘌呤能受体P2Y6对小胶质细胞激活、炎症因子表达分泌的影响和可能的作用机制，以及对多巴胺能神经元的影响；观察帕金森病（PD）患者外周血单核细胞表面P2Y6受体表达以及分泌的IL-8水平，以期揭示P2Y6受体在PD发病中的重要作用，以及作为PD诊断的生物学标记物的可能。方法1，检测LPS刺激后小胶质细胞P2Y6受体的变化，炎症因子MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6的释放；观察用SiRNA knockdown P2Y6受体后对小胶质细胞MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6表达的影响；用核苷酸降解剂观察对MIP-2的影响，检测小胶质细胞条件培养液对多巴胺能神经元存活率以及凋亡水平的影响。UDP作用于小胶质细胞后细胞外信号调节ERK1/2、P38激酶、JNK的变化，以及加入ERK1/2抑制剂后对COX-2、MIP-2表达的影响。2，采用定量PCR检测PD患者145例、帕金森综合征患者16例、健康对照170例的外周血单核细胞P2Y6受体mRNA的表达水平差异。检测43例PD患者和47例正常对照外周血单核细胞IL-8分泌水平和mRNA表达量的变化。结果1，LPS刺激下，P2Y6受体增高，MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6表达水平升高。2，用SiRNA knockdown P2Y6受体后降低LPS诱导的小胶质细胞MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6的表达；小胶质细胞条件培养液对多巴胺能神经元的毒性作用减弱，神经元凋亡减少。3，P2Y6受体通过ERK途径及NF-κB参与小胶质细胞激活及炎症因子产生。4，PD患者外周血单核细胞表面P2Y6受体mRNA水平增高，与PD患者的年龄、病程、疾病严重程度、PD临床分型、药物治疗均不相关，是一个稳定的生物学指标。5， PD患者和正常对照的外周血单核细胞在LPS刺激后IL-8 mRNA和分泌水平均升高，且PD患者在LPS刺激前后的水平均较正常对照组稍高，其增高率更明显，但尚未达到统计学意义。结论 P2Y6受体通过ERK通路参与LPS诱导的小胶质细胞激活，促进炎症因子释放，介导神经元损伤。PD患者外周血P2Y6受体水平增高，在LPS刺激后分泌的IL-8水平升高，提示外周血P2Y6受体水平可能作为帕金森病诊断的潜在生物标记。