反义核酸抑制TGF－β1表达及其抗肝纤维化的研究

将转化生长因子β1（TGF—β1）cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXSN，构建反义TGF—β1逆转录病毒载体pLATSN，用PA317细胞包装，获得病毒颗粒效价为3.75x10(5)CFU/ml，将其感染Ito细胞株LI90，经G418筛选，获得抗性克隆。分析结果发现转染细胞内有反义TGF-β1RNA表达，转染细胞表达、分泌的TGF-β1、TβRI、TIMP2、CoL1A1、CoL4A1mRNA和FN明显降低，表达的MT-MMP高于LI90细胞。采用联合脂质体和重组逆转录病毒方法，将反义TGF-β1基因注入CCl4诱导的大鼠大鼠纤维化模型肝脏内，结果发现转基因大鼠肝脏有反义TGF-β1RNA的转录和表达。同时内源性TGF-β1的表达、合成分泌，以及TβRI、TIMP1和FN阳性细胞明显减少，而MT-MMP、MMP2、MMP9、MMP3和TβRII阳性细胞明显升高，纤维化肝脏内的胶原纤维间隔明显减少，且贮脂细胞内的微管及致密颗粒也明显减少。提示反义TGF-β1RNA能通过抑制内源性的TGF-β1、TIMP和FN等的表达以及刺激金属蛋白酶的产生而降低ECM在肝脏的堆积，减缓或改善肝脏纤维化进程。