Filamin A与Caveolin-1相互作用对EGFR活化的影响

多种类型人类肿瘤细胞均过表达表皮生长因子受体（EGFR），EGFR与其配体结合并过度活化是肿瘤发生的重要细胞机制。存在于细胞膜上的小凹蛋白（Caveolin-1）可直接与EGFR结合并抑制其磷酸化。肌动蛋白结合蛋白Filamin A作为细胞内分子脚手架蛋白（scaffold protein）存在于富含Caveolin-1的细胞膜组分中，广泛参与细胞内多种信号转导，在肿瘤发生发展中起重要作用。但Filamin A，Caveolin-1和EGFR之间的关系尚不清楚。本研究拟采用实时定量PCR、Western Blot、IP、基因沉默、质粒转染和放射自显影等多种先进技术和方法，从不同侧面探讨Filamin A、Caveolin-1、EGFR三者之间的关系，并从多个环节探讨Filamin A 对EGFR活化的调控，为阐明FLNa参与肿瘤发生发展及肿瘤的治疗提供实验依据。

表皮生长因子受体（EGFR）与其配体结合并过度活化（磷酸化）是肿瘤发生的重要机制之一。以往的研究证明，Filamin A（FLNa）增强EGFR的活化与肿瘤恶性程度有关。小凹蛋白1（Caveolin-1，Cav-1）可直接与EGFR结合并抑制其磷酸化。本研究的预期目的是探讨FLNa通过何种机制影响EGFR的活化。在项目实施过程中我们发现，在不同类型的肿瘤细胞中，FLNa和Cav-1对EGF刺激引起的EGFR磷酸化的影响与前人的结果并不一致。因此，为明确FLNa、Cav-1调控EGFR的磷酸化对肿瘤细胞生物学行为的影响，本研究分别利用人黑色素瘤、乳腺癌和肺腺癌三种不同类型的肿瘤细胞株，在体外培养的细胞以及荷瘤小鼠模型上，从多方面观察了FLNa、Cav-1调控EGFR磷酸化对肿瘤细胞生物学行为的影响。包括：（1）建立稳定敲低FLNa表达和过表达Cav-1的肿瘤细胞株；（2）MTT法检测不同类型稳定转染细胞株的增殖能力；（3）划痕修复实验检测不同类型稳定转染细胞株的迁移能力；（4）Transwell小室检测不同类型稳定转染细胞的侵袭能力；（5）Western blot检测不同类型稳定转染细胞株EGF-EGFR信号通路蛋白的表达情况；（6）利用荷瘤裸鼠模型观察不同类型稳定转染细胞株在裸鼠体内的生长情况。结果发现，敲低FLNa表达可降低在EGF刺激下黑色素瘤UACC647细胞、肺腺癌GLC-82细胞中EGFR磷酸化的水平、降低这两种细胞的增殖、迁移、侵袭以及在裸鼠体内的生长能力；而敲低FLNa表达可增加在EGF刺激下乳腺癌MDA-MB-436细胞、MDA-MB-231细胞及肺腺癌A549细胞中EGFR磷酸化的水平、增加这三种细胞的增殖、迁移、侵袭以及在裸鼠体内的生长能力。增加Cav-1的表达可增加在EGF刺激下肺腺癌GLC-82细胞中EGFR磷酸化的水平、促进细胞的增殖、迁移、侵袭以及在裸鼠体内的生长；但增加Cav-1的表达可降低在EGF刺激下乳腺癌MDA-MB-453细胞中EGFR磷酸化的水平、降低细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。虽然FLNa、Cav-1在不同类型肿瘤细胞中对EGFR磷酸化水平的影响有相反的结果，但这些肿瘤细胞中EGFR磷酸化的水平与肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭以及在裸鼠体内的生长能力呈正相关。提示EGFR磷酸化水平较EGFR表达量在反映患者预后上更为重要。