Notch信号通路调控膀胱癌上皮间质转化的作用与分子机制研究

上皮-间质转化（EMT）在恶性肿瘤的侵袭与转移中发挥重要作用。一些重要信号通路包括Notch通路是调控肿瘤EMT发生的重要机制。Notch信号通路在膀胱癌EMT的具体作用及其调控机制尚未明确。在前期研究工作中我们发现Notch信号通路与膀胱癌病理分期、分级以及预后有密切关系。结合Notch信号通路在其它肿瘤EMT的作用和我们的初步研究结果，我们认为Notch信号通路可能在膀胱癌EMT过程中有重要的调控作用。本项目将通过RNA干扰技术等方法研究Nocth通路在膀胱癌EMT的作用及其分子机制，鉴定调控膀胱癌EMT的关键分子。研究Notch信号通路在膀胱癌EMT的作用，不仅有助于我们认识膀胱癌侵袭与转移的分子机制，而且通过鉴定调控EMT的关键分子及标记物，对膀胱癌的分子靶向治疗和早期诊断也将具有重要意义。

EMT是能够使肿瘤细胞失去极性，并获得高迁移、侵袭、抗凋亡及降解细胞外基质等间质表型特征细胞的能力。研究表明，Notch信号通路中的四种受体（Notch1-Notch4）及五种配体（Dll-1、Dll-3、Dll-4、Jagged-1和Jagged-2）与EMT的发生密切相关，但是其具体影响机制尚不明确。本研究通过利用γ分泌酶抑制剂完全阻断Notch信号通路、靶向沉默Notch1受体部分阻断Notch信号通路、上调Notch信号通路上游调控因子miR-200b以及在动物实验中阻断Notch信号通路四个方面来研究膀胱癌中Notch信号通路对EMT的调控作用。研究发现Notch信号通路被完全阻断后使膀胱癌细胞中EMT分子标志物E-cadherin表达上调，N-cadherin、Vimentin、Alpha-smooth muscle actin的表达下调，抑制EMT的产生，并影响膀胱癌细胞的耐药性、侵袭力。通过沉默Notch-1受体部分阻断Notch信号通路，进而抑制膀胱癌EMT进程，同时降低膀胱癌细胞抗凋亡能力和侵袭力。上调microRNA-200b能通过抑制Notch-1、Jagged-1的mRNA及蛋白表达，从而阻断Notch信号通路，抑制膀胱癌发生EMT，同时对膀胱癌细胞的耐药性、抗凋亡能力、侵袭性产生影响。抑制miR-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。在动物实验中，研究阻断Notch信号通路对膀胱癌生长、浸润性发展的影响。本研究的意义在于阐明Notch信号通路是通过调控膀胱癌上皮间质转化而影响膀胱癌浸润转移和耐药的主要机制，并探寻Notch信号通路在调控膀胱癌EMT的关键分子，为膀胱癌的分子靶向治疗与早期诊断提供依据。