布鲁氏菌在青海青藏高原喜马拉雅旱獭中的发现及初步研究

Brucellosis ( hereinafter referred to as brucellosis ), is caused by Brucella invasion of the body infection - allergic zoonotic infectious disease, is also a natural epidemic disease. Brucellosis not only endangers people's health and life, but also seriously affects the development of animal husbandry and national economy and people's livelihood. Many scholars had confirmed the Brucella isolated from nearly 30 species of wild animals over the past 80 years, but no reports of Brucella isolated from Marmota Himalayana had been reported. This study aimed at the discovery ofBrucella isolated from Marmota Himalaya in Qinghai- Tibet plateau to study the biological characteristics and molecular biology of Brucella strains which were isolated from different host by using the method of cross-sectional investigation and combining brucellosis serology, bacteriology, molecular biology, geographic information system space technology, analysis it evolution and relationship and epidemiological tracing. we studied the epidemiological characteristics of brucellosis in Marmota Himalaya and explored the interaction among brucellosis, Marmota Himalayana, livestock and population. The new technology is used to assess the risk of transmission, which provides a scientific basis for the development of new ways and new ideas of brucellosis prevention and control technology in Qinghai province.

布鲁氏菌病（以下简称布病），是由布鲁氏菌(布氏菌)侵犯机体引发的传染—变态反应性人畜共患传染病，也是自然疫源性疾病。布病不仅危害人群健康和生活，也严重影响畜牧业发展和国计民生的需求，对旅游业也有一定影响。在过去80多年中, 各国学者证实在近30种野生动物中分离到布氏菌，但未见从喜马拉雅旱獭中分离出布氏菌的报道。本研究针对在青海省青藏高原喜马拉雅旱獭中发现布鲁氏菌，采用现况调查的方法，结合布病血清学、细菌学、分子生物学、地理信息系统空间技术等方法，对分离自不同宿主的布氏菌菌株进行生物学特性和分子生物学研究，分析菌株进化及亲缘关系，进行流行病学溯源。研究布病在喜马拉雅旱獭中的流行特征，探索布病、喜马拉雅旱獭、家畜、人群之间的相互作用关系。采用新的技术手段评估传播风险，为青海省制定布病防控技术的新途径、新思路提供科学依据。

项目以青海省青藏高原喜马拉雅旱獭自然栖息地为背景，研究布鲁氏菌在喜马拉雅旱獭中流行、分布、生物学特征等。采用现况调查的方法，在青海省青藏高原地理地貌、植被类型、气候特征、动物组成等方面各具特色的羌塘高原区、青南高原区、青藏高原向黄土高原的过渡区、祁连山区、柴达木盆地区5个区域内，采集喜马拉雅旱獭样品1466匹。布鲁氏菌病血清抗体检测阳性64匹，首次从喜马拉雅旱獭中培养分离到5株布鲁氏菌，其中从全血中培养分离出4株羊种布鲁氏菌，均为羊种Ⅲ型，脏器肺中培养分离出1株牛种布鲁氏菌，为牛种Ⅰ型。对近年在人、家畜、喜马拉雅旱獭中分离的布鲁氏菌68株进行了基因测序，采用布鲁氏菌全基因组单核苷酸多态性(WGS-SNP)分析，其中54株羊种布鲁氏菌基因组测序，用SNP矩阵最小生成树(MST)把54株菌分为9个克隆复合体(CC1-CC9)和18个单一基因型。在全球范围内MST比对发现，54株菌株被分为8个不同的进化分支(B1-B8)，每个分支形成一个独立的谱系。分离自人的菌株与分离自喜马拉雅旱獭的菌株呈现密切的相关性，从基因组水平揭示了人类和喜马拉雅旱獭之间存在着直接和/或间接关联。从喜马拉雅旱獭和人全血中分离的牛种布鲁氏菌，基于MLVA-16基因分型发现两株牛种布鲁氏菌呈现新的基因型，并与内蒙古、新疆的菌株有高度的同源性。应用地理信息系统(GIS)和无人机技术，初步评估了人群、家畜、喜马拉雅旱獭在同一生活环境中，相互之间存在布鲁氏菌病传播链，家畜与喜马拉雅旱獭、家畜与人群、环境与人群存在传播风险。基因组测序表明青海省青藏高原有多个独立的羊种布鲁氏菌克隆在流行，近年发生的多起人间布鲁氏菌病暴发是由多个本土起源血统的多个克隆复合体引起。通过现场调查和溯源研究，初步探索了布鲁氏菌对喜马拉雅旱獭、家畜、人群存在感染与致病，互为传染源时形成循环传播风险。揭示了该地区布鲁氏菌病的传播和流行规律，为更好理解青海省青藏高原地区布鲁氏菌病的流行病学特征提供了新的借鉴，应逐步强化基因组检测，为了解该地区布鲁氏菌病流行的全貌提供详细的分子线索。