GAGE基因的重组表达、血清学分析及其致敏树突状细胞抗肝癌活性探讨

GAGE gene is one of the cancer testis antigen (CT antigen). CT antigen family members were considered to be a broad-spectrum tumor associated antigen because of the different frequency of expression in extensive tumor tissues but showed low expression in normal tissues except germ cells. The GAGE protein was concerned because it can cause cellular and humoral immune responses. Our preliminary study found that the mRNA level of GAGE(GAGE-1,2,8) showed high expression in HCC tissues. And it can be used as molecular marker for possible target for immunotherapy of human HCC, but which need to be validated. Combined with previous research results,our project proposed as follows: with ELISA to detect the expression levels of anti GAGE antibody in hepatocellular carcinoma, cirrhosis, hepatitis and normal human serum, and explore the possibility of GAGE as hepatocellular carcinoma associated antigen. GAGE-MBP recombinant fusion protein were expressed and purified by using genetic engineering methods in vitro. Investigate the ability of pulsed DCs with GAGE-MBP to stimulate autologous T lymphocytes into CTL, and also detect its cytotoxicity on hepatocellular carcinoma cell. preliminarily explore the clinicial application of GAGE in HCC and its development feasibility of being hepatocellular carcinoma vaccine.

GAGE基因属癌-睾丸抗原（Cancer-Testis Antigen, CT抗原）之一。CT抗原家族成员因在广泛肿瘤组织中有不同频率表达，而在正常组织除生殖细胞外均呈低表达,被认为是一类广谱的肿瘤相关抗原。GAGE蛋白因可致机体产生细胞及体液免疫反应而备受关注。课题组前期研究发现GAGE基因mRNA在肝细胞癌表达频率较高，提示其在肝癌诊治中具有一定的应用价值，但有待验证。本项目结合前期研究结果，拟进行如下深入研究：⑴ELISA检测抗GAGE抗体在肝癌、肝硬化、肝炎及正常人血清中的表达水平，探索GAGE作为肝癌相关抗原的可能性。⑵重组表达GAGE蛋白并致敏肝癌患者树突状细胞（Dendritic cells,DCs），体外观察致敏DCs诱导的自体细胞毒Ｔ细胞（CTL）对肝癌细胞的特异性杀伤作用，并探索以DCs为基础的GAGE瘤苗在肝癌的免疫效应机制，拟在评价GAGE作为肝癌疫苗开发的可行性。

GAGE 基因属癌-睾丸抗原（ CT 抗原）之一。CT 抗原家族成员因在广泛肿瘤组织中有不同频率表达，而在正常组织除生殖细胞外均呈低表达,被认为是一类广谱的肿瘤相关抗原。课题组前期研究发现 GAGE 基因 mRNA在肝细胞癌表达频率较高，提示其在肝癌诊治中具有一定的应用价值，但有待验证。本项目结合前期研究结果，进行如下研究：① ELISA 检测抗 GAGE 抗体在肝癌、肝硬化、肝炎及正常人血清中的表达水平，免疫组化检测GAGE蛋白在肝癌组织的表达情况，探索 GAGE 作为肝癌相关抗原的可能性。② 重组表达 GAGE 蛋白并致敏肝癌患者树突状细胞（DC），体外观察致敏 DC诱导的自体细胞毒Ｔ细胞（CTL）对肝癌细胞的特异性杀伤作用，并探索以 DC为基础的 GAGE 瘤苗在肝癌的免疫效应机制，拟在评价 GAGE 作为肝癌疫苗开发的可行性。. 重要研究结果如下：①肝癌细胞株QGY-7701 中GAGE-1 基因mRNA 呈阳性表达，提示GAGE-1基因具有作为诊断肝癌的分子标记和免疫治疗肝癌的特异性靶位的潜在价值；②成功表达纯化了GAGE-1融合蛋白，为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础；③ 血清学检测发现肝癌患者血清中GAGE-1抗体阳性率与其他组之间，统计学有显著性差异。④ 免疫组化检测发现，60例HCC组织和相应癌旁肝组织中，HCC GAGE-1蛋白阳性率为 43.3% （26/60）；癌旁阳性率5% （ 3/60），GAGE-1蛋白阳性率与HCC的病理分级有相关性(P <0.05)，表明 GAGE-1蛋白在HCC中表达频率较高，具有较强的免疫原性，有望将其应用于HCC辅助诊断及肿瘤免疫治疗。. 项目后期横向开展了运用gp96（是免疫治疗中的一种常用佐剂，属于HSP90家族）和smp30（重组衰老标记蛋白30）联合刺激树突状细胞，诱导生成CTL后观察后者对肝癌的杀伤作用。结果转染的树突状细胞比对照组分泌更多的TNF-α和干扰素-β，诱导更多的CTL。表明GP96和SMP30在肝癌中共表达，两种蛋白之间可能存在相互作用。提示它们作为疫苗的组合可以刺激树突状细胞，从而获得更好的抗肝癌作用。