晚期肾癌中lncRNA CRNDE 激活NF-κB促进肿瘤侵袭转移的机制研究

The regulation mechanism of cellular metastasis and invasion in advanced renal carcinoma has been a research hot spot these years. Recently, the role of long noncoding RNAs (lncRNA) in human cancers has drawn much attention. In our previous research, we found that lncRNA CRNDE was overexpressed in advanced renal carcinoma. Downregulation of CRNDE impaired renal carcinoma cell proliferation and invision. Overexpressed CRNDE could activate NF-κB to increase the expression of uPA and increased uPA was thought to play important roles in tumor cell metastasis and invasion. As a result, we speculated CRNDE may play an important part in cell invasion and metastasis by activating NF-κB and increasing the expression of uPA.. In this research, we aim to clarify the relationship between the expression of CRNDE and the clinical characters of advanced renal carcinoma, to study the influence of CRNDE on biological function and to explore the mechanism of CRNDE on cell invasion and metastasis by activating NF-κB. These findings may provide new insights into the pathogenesis of advanced renal carcinoma and lead to new approaches for the effective therapy of this disease.

晚期肾癌中细胞侵袭转移的机制是近年来研究热点。长链非编码RNA（lncRNA）在肿瘤中作用逐渐被关注。本课题组研究发现lncRNACRNDE在转移性肾癌组织中的表达显著高于局限性肾癌组织，下调CRNDE表达可导致肾癌细胞增殖以及侵袭能力下降；过表达CRNDE后，NF-κB被激活，进而导致uPA表达的升高，而uPA的激活被报道可增加肿瘤细胞的增殖以及侵袭能力。据此，我们推测晚期肾癌中异常增高的CRNDE可通过NF-κB的激活、uPA表达水平的升高而增加肿瘤的侵袭转移能力。. 本研究拟在前期工作的基础上①明确CRNDE表达与晚期肾癌患者临床病理特征的关系；②揭示CRNDE对晚期肾癌细胞生物学行为的影响；③阐明CRNDE激活NF-κB导致肿瘤细胞增殖侵袭能力改变的分子机制。以揭示lncRNA CRNDE在晚期肾癌发生发展中的作用及机制，为晚期肾癌的治疗提供理论依据。

项目背景: 前期研究发现长非编码RNA CRNDE在肾癌中表达升高，其可能会通过调节NF-KB的表达引起肾癌侵袭转移能力增强，但其在肾癌中的作用及作用机制仍未阐明。 .研究内容：首先明确lncRNA CRNDE表达与肾癌患者临床病理特征及预后的关系，明确lCRNDE对肾癌细胞生物学行为的影响，阐明lncRNA CRNDE通过NF-κB 调节肾癌细胞侵袭转移的分子机制。.重要结果和关键数据：收集新鲜局限性肾癌标本40例、晚期肾癌患者手术切除的肾癌标本40例，采用荧光定量PCR方法检测CRNDE在局限性肾癌及晚期肾癌中的表达，分析其表达与肾癌患者临床病理特征的关系。结果显示CRNDE在转移性肾癌患者中的表达明显高于局限性肾癌，CRNDE表达与肾癌患者预后相关，CRNDE高表达肾癌患者生存期显著低于低表达患者。构建CRNDE过表达及敲低shRNA腺病毒，转染肾癌细胞后，检测过表达及敲低效率。结果显示，与对照组相比，CRNDE过表达组 CRNDE的表达明显升高；转染shRNA腺病毒组，CRNDE的表达明显降低。进一步探讨CRNDE对肾癌生物学行为的影响，结果显示CRNDE 表达下降后细胞的增殖及侵袭能力明显降低。动物实验结果显示，CRNDE敲低组肿瘤体积较对照组明显缩小。进一步分析CRNDE发挥作用的分子机制。RNA pull down后质谱分析发现lncRNA CRNDE可与NF-κB相结合，采用Western blot和RIP验证NF-κB可与CRNDE结合。过表达lncRNA CRNDE后，NF-κB明显激活，p-NF-κB表达升高。生物信息学分析uPA的启动子区有NF-κB的结合位点，且过表达lncRNA CRNDE后uPA的表达都明显升高。下调NF-κB 后再表达CRNDE，与转染对照siRNA后再过表达CRNDE组相比，uPA的表达明显下降，这就提示lncRNA CRNDE可通过NF-κB调节uPA的表达。但NF-KB是如何调节uPA的,目前尚不清楚,有待继续深入研究。 .科学意义：本研究明确了lncRNA CRNDE在晚期肾癌细胞的表达特点及与患者临床病理特征的关系，且发现该LncRNA可通过激活NF-κB 促进uPA基因的表达，进而促进肾癌的转移。该研究将加深对晚期肾癌发病机制的了解，并为今后有效的防治晚期肾癌提供新的分子靶点和理论基础。