抗SYT-SSX1单克隆抗体的制备及功能与机制的研究

95%以上的滑膜肉瘤具有特异性的染色体异位，形成融合基因SYT-SSX。由于缺乏特异性的抗体，SYT-SSX的检测主要依赖于RT-PCR和FISH技术，同时也限制了基础研究的进展。目前国际上研究主要集中于回顾分析SYT-SSX表达与滑膜肉瘤病人预后的关系，而对于SYT-SSX的功能及机制研究甚少。我室前期通过RNA干扰技术揭示了融合基因SYT-SSX的部分功能，在此基础上，本研究拟通过经典的融合技术，制备出特异的抗SYT-SSX的单克隆抗体，并利用这特异性的抗体，围绕SYT-SSX表达水平对滑膜肉瘤细胞生物学相关行为的影响，SYT-SSX表达与滑膜肉瘤病人预后，转移和化疗耐药性的关系，SYT-SSX在肿瘤发生发展中的作用及分子机制开展系统的研究。通过特异性单抗的制备和后续功能机制的研究，这对阐明SYT-SSX1的功能，并在此基础上开发新的抗肿瘤靶标药物，均具有重要理论意义和潜在的应用价值

滑膜肉瘤是一种恶性软组织肉瘤，主要侵及四肢，可发生于各个年龄段但好发于青少年，其约占全部软组织肿瘤的10%，1/4以上的患者在诊断后五年内死亡。95%以上的滑膜肉瘤具有特异性的t(X;18) (p11.2;q11.2)染色体异位。即18号染色体上的SYT基因与X染色体上的SSX（SSX1, SSX2, SSX4 ）发生融合。由于该融合基因在滑膜肉瘤出现的高频性和特异性，使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）或荧光原位杂交技术（Fish）来检测融合基因的表达已经成为滑膜肉瘤诊断的金标准。虽然SYT-SSX融合基因的功能并不明确，但其可在滑膜肉瘤肿瘤形成及发展中起到重要作用。应用siRNA干扰融合基因表达后，肿瘤细胞的侵袭及迁移能力明显降低。融合基因类型与患者临床病理特征及预后之间的关系有很多报道但还不明确。搜集我院治疗的92例具有完整病例资料患者的手术标本。应用RT-PCR检测融合基因的表达情况，单因素及多因素生存分析患者生存预后与各种临床病例因子之间的关系。融合基因的比例大约为1：1，单向性滑膜肉瘤多具有SYT-SSX2融合基因，而双向性滑膜肉瘤多表达SYT-SSX1融合基因；且SYT-SSX2阳性患者的肿瘤体积明显小于SYT-SSX1阳性患者的肿瘤体积。单因素及多因素生存分析发现表达SYT-SSX2、FNCLCC2级及UICC 1或2期的病人预后较好。将SYT-SSX1及SYT-SSX2转染入HEK293T 及NIH3T3细胞系内，观察融合基因对细胞侵袭及迁移能力的影响。 SYT-SSX1阳性细胞较SYT-SSX2阳性细胞有更高的侵袭及迁移能力。我们在前期实验中发现当3T3细胞、293T细胞转染融合基因SYT-SSX1及SYT-SSX2后，引起细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化。文献中报道3T3细胞转染融合基因SYT-SSX1后可表现为滑膜肉瘤细胞系的特征，因此我们应用Affymetrix microRNA 3.0 Array芯片对3T3-GFP,3T3-SYT-SSX1,3T3-SYT-SSX2细胞进行芯片分析，以期望得到与滑膜肉瘤肿瘤产生及影响其预后的microRNA。