溶藻弧菌外膜耐药功能蛋白组的研究

抗生素滥用导致水产品药物残留等食品安全问题，直接或间接影响人类健康和生态环境。因此，积极开展水产动物病原菌耐药分子机制的研究，对减少和避免抗生素的使用具有非常重要的意义。本课题拟以严重危害水产养殖动物的溶藻弧菌为研究对象，在前期对卡那霉素、红霉素、四环素、萘啶酮酸、链霉素、氯霉素耐药菌外膜差异蛋白质研究的基础上，采用基于native-SDS/PAGE的蛋白质组学技术路线结合蛋白质-蛋白质相互作用技术方法，开展溶藻弧菌外膜耐药功能蛋白质复合物组的研究,发现和鉴定相关耐药功能蛋白质。进一步采用基因敲除和高表达方法对关键外膜耐药蛋白复合物的耐药功能进行功能研究。同时研究这些关键蛋白质复合物组对不同抗生素反应的规律，初步阐明外膜耐药蛋白质复合物组的耐药作用机制。在此基础上，优选抗体作用靶点，探讨抗体靶向配合低浓度抗生素抑制耐药菌的可行性。

抗生素滥用导致水产品药物残留等食品安全问题，直接或间接影响人类健康和生态环境。因此，积极开展水产动物病原菌耐药分子机制的研究，对减少和避免抗生素的使用具有非常重要的意义。项目以模式大肠杆菌和严重危害水产养殖动物的溶藻弧菌为研究对象，采用基于native-SDS/PAGE的蛋白质组学技术路线结合蛋白质-蛋白质相互作用技术方法，开展溶藻弧菌和大肠杆菌外膜耐药功能蛋白质复合物组的研究。结果发现，溶藻弧菌巴洛沙星耐药菌、四环素耐药菌、链霉素耐药菌、头孢他啶耐药菌、氯霉素耐药菌发生变化的蛋白复合物依次有6、4、4、4、5种，主要与能量代谢相关的蛋白质复合物，其中溶藻弧菌Na+-NQR系统复合物极为重要。为确认这些发现，采用基因克隆、原核表达、重组蛋白纯化和抗体制备，对这些差异蛋白及其复合物进行了验证。进一步采用缺失菌株和高表达菌株对这些重要复合物进行功能研究，结果发现能量代谢相关复合物组功能下调，导致质子动力势下降，使抗生素进入细胞减少。这一机制阐明对理解细菌耐药特性与能量代谢代偿的关系具有重要意义。项目发表论文9篇，其中SCI论文8篇，影响因子均大于3 (大约5的2篇); 部分内容获省科技进步一等奖1项。