SRAP分子标记技术辅助重离子束辐照培育高品质大青叶

为满足中药现代化发展的需要，中药材的良种选育和快速栽培成为亟待解决的问题。重离子束辐照诱变是获得具有优良性状植物突变体的重要手段。相关序列扩增多态性（SRAP）是近几年发展起来的新型分子标记技术，具有简便、稳定、高共显性、易于得到选择条带序列等优点，被广泛应用作物遗传图谱的构建、遗传多样性、基因定位等方面的研究。本课题将重离子束辐射诱变育种和新型分子标记技术相结合，应用不同剂量重离子束对大青叶种子进行辐照诱变，利用SRAP技术和混合集群分析(BSA)法，对调控其有效成分含量的基因类型进行分析，筛选出与调控有效成分含量的基因紧密连锁的SRAP分子标记，分析重离子辐照诱变可能的机理和规律，为筛选优质大青叶诱变体（富含4（3）H喹唑酮）提供一种快速有效的鉴定方法。

将重离子束辐射诱变育种和新型分子标记技术相结合，应用不同剂量重离子束对大青叶种子进行辐照诱变，系统研究了其对植株的生物学性状和次生代谢产物含量等方面的影响。探讨了重离子束辐照对菘蓝（大青叶）M1代的生物学效应，表明：碳重离子束辐照菘蓝种子具有明显的当代损伤效应, 并可显著提高大青叶中靛玉红和4(3H) 喹唑酮的含量，其辐照适宜诱变剂量为35 Gy；碳离子束辐照大青叶种子有利于大青叶中的可溶性糖、丙二醛和酚酸类类化合物含量的积累，40 Gy 左右的辐照剂量有利于酚酸类化合物及抗逆性物质的积累;建立了快速、简便的高效液相色谱分析检测大青叶中4(3)H喹唑酮及靛玉红含量的方法；建立与优化大青叶SRAP-PCR反应体系，并找到与产生有效成分4(3)H喹唑酮基因连锁的分子标记。同时，根据中药现代化的最新进展，增加了：①大孔树脂对大青叶有机酸的纯化工艺研究工作，通过静态和动态相结合的方法，以邻氨基苯甲酸的吸附率、解吸率为指标，优化大孔树脂纯化大青叶提取液中有机酸的工艺参数；②大青叶中靛蓝、靛玉红提取纯化工艺的研究。研究进展顺利并取得了较好的结果。