民间药用微籽龙胆抗阿尔茨海默病的活性成分研究

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disorder which seriously causes the dementia in elderly people and afflicts millions of people worldwide. It is extremely urgent to find novel acetylcholinesterase inhibitors with higher potency and less adverse effects. Gentiana delavayi Franch, an annual herb belonging to Gentianaceac of Gentiana, is a frequently used Bai traditional medicine in Northwestern, Yunnan. It was found to possess the inhibitory effect against Alzheimer's disease, and its chloroform extract demonstrated potent anti-acetylcholinesterase activities in our previous investigation. The project is study on the effective fraction and bioactive constituents of Gentiana delavayi to Alzheimer's disease. The bioactive constituents are isolated and identified from G. delavayi by screening the inhibition of acetylcholinesterase and antioxidant activity of the effective fraction. By evaluating the cytotoxicities of the bioactive constituents with MTT bioassays, and evaluating effects of the effective fraction and bioactive constituents from G. delavayi on mice with learning and memory acquisition impairment induced by scopolamine, and discussing the preliminary probe into their mechanisms. These results will provide experimental bases for the discovery of new bioactive constituents with anti-Alzheimer's disease from G. delavayi.

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经系统退行性疾病，严重威胁老年人的健康并对整个社会发展带来沉重的负担。寻找高效、低毒的乙酰胆碱酯酶抑制剂一直是抗AD药物研发的主要发展方向。微籽龙胆为龙胆科龙胆属一年生草本植物，是滇西北地区白族民间常用药材，用于治疗痴呆有一定疗效，前期研究证实该药材的粗提物，特别是氯仿部位显示有明显的抑制乙酰胆碱酯酶活性。本项目以其抑制乙酰胆碱酯酶活性及抗氧化活性为靶标，对微籽龙胆抗AD活性部位的活性成分进行分离、鉴定。采用MTT法评价活性组分和单体的细胞毒性，采用东莨菪碱复制小鼠记忆获得障碍模型，评价其活性组分及单体对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的改善作用，初步探讨其抗AD的作用机制。该研究成果将为微籽龙胆中抗AD活性化合物的发现提供实验依据。

阿尔茨海默病(AD)是一种中枢神经系统退行性疾病，严重威胁老年人的健康并对整个社会发展带来沉重的负担。本项目以抑制乙酰胆碱酯酶活性以及抗氧化活性为靶标，对微籽龙胆抗AD活性部位的活性成分进行分离和鉴定。并在分子细胞水平上观察了微籽龙胆各组分及其化合物对β淀粉样蛋白前体蛋白（APP）加工过程的影响。根据微籽龙胆中活性组分和活性单体抑制AchE活性、细胞毒活性以及它们对APP/PS1 CHO细胞上清液中Aβ40，Aβ42的含量以及β淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）活性的检测结果，评价其抗AD效果。采用Western-blot方法检测活性组分及活性单体化合物对APP以及Aβ降解酶—脑啡肽酶的表达，初步探讨其作用机制。研究发现：微耔龙胆的氯仿部位和正丁醇部位均有抑制乙酰胆碱酯酶活性，正丁醇部位中有3个组分具有抗氧化活性。从微耔龙胆中分离鉴定了108化合物，其中，新化合物 35个。化合物类别分别为环烯醚萜和裂环烯醚萜类、三萜类、黄酮类及苯甲酸衍生物类等。在微耔龙胆中有6个化合物具有明显的AchE抑制活性，有3个化合物具有较强的抗氧化活性。建立了抗AChE活性单体的定性和定量HPLC分析方法，该方法分离度及线性关系良好，方法学考察符合要求，为微耔龙胆药材的采集及质量控制提供科学依据。进一步研究发现，微耔龙胆中有2个组分及2个化合物对细胞外Aβ40、Aβ42的产生具有显著的抑制作用且无细胞毒活性。微籽龙胆活性组分L6和单体WL48在体外通过特异性抑制β-分泌酶从而抑制β淀粉样蛋白的产生，并增加淀粉样蛋白降解酶的表达，从而加速了Aβ的降解，表现出多靶点的药理作用。该结果提示微籽龙胆中的有效成分有进一步向阿尔茨海默病防治药物开发的潜力。微籽龙胆中活性组分F11和活性单体WF55既有抑制AChE活性，又有显著抑制PS1/APP CHO细胞外液中的Aβ40和Aβ42产生的活性，其作用机制有待进一步研究。