经鼻诱导Th3细胞活化负向调节动脉粥样硬化机制研究

通过粘膜诱导免疫耐受已成为研究和防治自身免疫性疾病和慢性炎症性疾病的重要策略。近年来，诸多学者指出动脉粥样硬化（AS）是一种自身免疫性疾病。经粘膜给予免疫原可诱导免疫耐受、活化调节性T细胞、上调抗炎因子水平，继而延缓AS的发生发展。我们的临床研究提示Th3细胞的升高可能促进了斑块的稳定。Th3细胞是粘膜免疫耐受时诱导活化的最常见、最重要的一型调节性T细胞，我们近期的预实验也表明低剂量oxLDL可以诱导活化Th3细胞。本课题将采用经鼻给予oxLDL诱导Th3细胞活化的方法，运用免疫学和分子生物学技术，研究Th3细胞对AS免疫炎症反应和斑块发生发展的影响及机制，深入探讨诱导免疫耐受、Th3细胞和AS三者关系。上述研究的结果将有助于阐明AS免疫炎症反应的负向调控机制，以诱导免疫耐受和Th3细胞为靶点，拓宽冠心病一级预防和二级预防的思路。

此项研究中，首先，我们检测免疫原ox-ldl对CD4+LAP+ Tregs的影响。将ApoE-/-小鼠分为PBS对照组（PBS组）和经鼻ox-ldl干预组（ox-ldl组），分离脾脏细胞后予ox-ldl刺激，结果表明：ox-ldl组脾脏细胞在ox-ldl刺激下，其增殖能力明显弱于PBS组。于给药后0、4、14天，流式检测脾脏发现：CD4+LAP+ Tregs比例，尤其是CD4+CD25-LAP+ Tregs，随时间逐渐上调，CD4 +CD25 +Foxp3 +结果类似。相反，效应性T细胞（Th1、Th2、Th17）却明显减少。分选脾脏CD4+ LAP+ Tregs，予ConA刺激后检测结果表明：ox-ldl鼻饲可促进CD4+ LAP+ Tregs分泌TGF-β。其次，我们检测ox-ldl或HSP鼻饲对动脉粥样硬化发生发展的影响。为研究ox-ldl对AS发生的影响，设置ox-ldl早期干预组和对照组；为研究ox-ldl对AS发展的影响，设置晚期干预组、对照组、强化组。结果表明：早期干预显著减轻斑块发生，同时，晚期干预可明显抑制斑块的发展，以强化组效果为佳。发现，ox-ldl鼻饲可明显减少脾脏和动脉的MCP-1、 INF-γ、IL-4及IL-17表达，而增加抑炎因子TGF-β1表达。流式分析脾脏结果相似。另外，给予anti-TGF-β可抵消ox-ldl的保护作用，。在另一研究中，我们发现：给予HSP60鼻饲亦可抑制AS的发生，而对AS的发展并无明显影响。HSP60鼻饲可明显抑制小鼠体内IFN-γ的表达，而增加TGF-β1和IL-10的表达。流式分析脾脏结果相似。而给予anti-TGF-β可抵消HSP60的保护作用。在第三项研究中，我们探讨胸腺基质淋巴细胞素（TSLP）在AS粘膜耐受中发挥的作用，结果表明：TSLP或TSLP-DCs可抑制AS的发展，并首次阐明了AS中TSLP、DC、TGF-β、Tregs之间的关系。.我们的研究表明：鼻饲HSP60/65或ox-ldl可诱导ApoE-/-小鼠CD4+LAP+ Tregs和CD4+CD25+Foxp3+Tregs生成，进一步促进TGF-β表达并抑制炎症反应，从而缓解动脉粥样硬化的发生发展。本研究阐明了鼻饲免疫原产生免疫耐受的机制，希望本研究为AS的预防或治疗提供理论依据。