188-Re联合5-Fc对导入pPEG-3调控的CD-IRES-NIS基因的甲状腺髓样癌的靶向治疗作用研究

甲状腺髓样癌（MTC）来源于甲状腺滤泡旁细胞，具有多灶性发生和淋巴结转移出现早的生物学行为特点，其对放、化疗均不敏感，再加上肿瘤细胞没有摄碘能力，亦不能使用131I对肿瘤及其转移灶进行内照射治疗，因此预后较差。本研究拟将肿瘤特异性启动子pPEG-3、钠-碘转运体（NIS）基因联合"自杀基因"-胞嘧啶脱氨酶（CD）基因导入MTC，利用pPEG-3的肿瘤细胞选择特性，使目的基因在肿瘤细胞内特异表达，从而使不具摄碘功能的肿瘤细胞获得摄碘功能，进而观察在pPEG-3的靶向调控下以及前体5-Fc转化产物5-Fu的辐射增敏作用下，放射性核素内照射联合"自杀基因"CD/5-Fc对MTC肿瘤细胞的双重杀伤效果，并同时利用NIS报告基因显像手段在体观察转染效果，为其他不摄取碘的肿瘤的基因靶向内照射治疗开拓新的方向。

构建肿瘤特异性启动子pPEG-3调控下的CD与NIS双顺反子重组载体，利用同样方法构建不包含pPEG-3片段的CD-IRES-hNIS腺病毒载体用于对照试验。用以上方法所建立的pPEG3-CD-IRES-NIS以及CD-IRES-NIS腺病毒载体体外稳定转染培养的人甲状腺髓样癌TT细胞，通过RT-PCR、Western Blot检测NIS以及CD的表达，挑选建立阳性克隆细胞系。将两种腺病毒载体的阳性克隆各自分为188Re与5-Fc联合治疗组、188Re单独治疗组以及5-Fc单独治疗组，进行体外杀伤实验，并设非转染T细胞及导入pPECD-IRES-NIS腺病毒载体的正常甲状腺细胞为两组空白对照，采用MTT法方法检测杀伤效果，发现联合用药较单独用药的对导入pPEG3-CD-IRES-NIS以及CD-IRES-NIS腺病毒载体的靶细胞均具有明显的杀伤效果，而对空白细胞则没有杀伤。明确了pPEG-3的靶向性及联合治疗的优越性。建立荷人甲状腺髓样癌肿瘤细胞的荷瘤裸鼠模型，进行瘤内多点注射pPEG3-CD-IRES-NIS腺病毒载体进行在体转染，注射后24小时，48小时及72小时分别取裸鼠静脉注射188Re进行NIS报告基因SPECT显像。结果表明，注射后2小时移植瘤部位开始显像，48小时显像效果最佳。将实验荷瘤鼠分为188Re联合5-Fc、131I 联合5-Fc两个联合治疗组和单纯188Re、5-Fc、131I 3个单纯治疗组，进行在体杀伤试验，观察不同剂量、不同给药时间点裸鼠瘤体体积的变化；并进行病理学检测，观察188Re联合CD/5-Fc的协同杀伤效果。结果表明，联合治疗组的治疗效果优于单纯治疗组，188Re联合5-Fc治疗组的治疗效果与131I 联合5-Fc治疗组相比没有显著差异。该试验结果表明，导入pPEG3-CD-IRES-NIS可以使不摄取131I的甲状腺髓样癌细胞拥有摄取131I/188Re的能力，使得使用放射性核素进行靶向内照射治疗成为可能。共转染的pPEG保证了目的基因表达的肿瘤特异性，188Re/131I与NIS的特异性结合既可以使基因转染可视化，又发挥了核素靶向内照射治疗的作用，再联合CD自杀基因治疗，最终实现对MTC以及其他不摄取131I的肿瘤的双重治疗效果，达到增强疗效，提高靶向性、安全性及可监控性的目的。188Re与131I的治疗效果无明显差异。