表达人端粒酶趋化抗原的溶瘤性单纯疱疹病毒的抗肿瘤作用机制的研究

溶瘤性单纯疱疹病毒具有强效、特异、广谱、安全及易于生产制备等特点。本项目主要研究新型溶瘤性II型单纯疱疹病毒(oncolytic HSV2，简称oHSV2) 作为基因载体制备基因疫苗，在溶瘤的同时，进一步诱导抗肿瘤免疫应答。我们已构建了具有自主知识产权的以端粒酶为抗原的广谱肿瘤趋化抗原基因疫苗（SLC-Te-Fc），完成了oHSV2的构建。在此基础上，将构建能表达SLC-Te-Fc的新颖性溶瘤HSV2(oHSV2-SLC-Te-Fc)。将该病毒作瘤内注射，在溶解肿瘤的基础上，以期诱导肿瘤微环境中及全身的抗肿瘤特异性免疫反应，产生持久的抗肿瘤免疫。因此，本课题设计的亮点为：通过oHSV2-SLC-Te-Fc的治疗，将肿瘤病灶转变成原位瘤苗。.本项目围绕的科学问题是：拟构建的oHSV2-SLC-Te-Fc能否兼备溶瘤作用和特异性免疫诱导作用？我们将用实验阐明其抗肿瘤作用机制。

溶瘤性单纯疱疹病毒具有强效、特异、广谱、安全及易于生产制备等特点。本项目主要研究新型溶瘤性II型单纯疱疹病毒(oncolytic HSV2，简称oHSV2) 作为基因载体制备基因疫苗，在溶瘤的同时，进一步诱导抗肿瘤免疫应答。项目开始前，我们已构建了具有自主知识产权的以端粒酶为抗原的广谱肿瘤趋化抗原基因疫苗（SLC-Te-Fc），完成了oHSV2的构建。项目启动后，我们构建了能表达SLC-Te-Fc的新颖性溶瘤HSV2（oHSV2-SLC-Te-Fc，又称oHSV2-CADV）。鉴定实验显示SLC-Te-Fc表达序列插入到病毒基因组ICP34.5位点及oHSV2-CADV能稳定表达SLC-Te-Fc融合蛋白。进一步我们从体内外对病毒的抗肿瘤作用机制进行了较为深入的研究。..用11种肿瘤细胞系对oHSV2-CADV的体外杀瘤作用进行了评估。实验表明，oHSV2-CADV能杀伤多种肿瘤细胞，在MOI为1的条件下，48小时几乎可杀死所有的肿瘤细胞。..体内试验显示：（1）用小鼠黑色素瘤模型显示oHSV2-CADV在的抑瘤效果上强于另外两种报道较多的溶瘤I型和II型单纯疱疹病毒。（2）治疗小鼠B16R黑色素瘤，oHSV2-CADV在体内抑瘤效果方面优于pSLC-Te-Fc DNA疫苗。（3）oHSV2-CADV联合化疗药治疗小鼠乳腺癌（4T1）有协同疗效。（4）oHSV2-CADV病毒治疗完全消除CT-26鼠结肠癌后使BALB/c小鼠获得长效的抗肿瘤免疫反应，能抵抗CT-26瘤细胞再攻击成瘤。（5）A20鼠淋巴瘤菏瘤模型显示病毒治疗后激活肿瘤免疫以保护一周和6个月后静脉注射A20细胞诱发的肿瘤肝脏转移。（6）oHSV2-CADV治疗4T1乳腺癌能显著上调菏瘤鼠脾内的肿瘤杀伤NK细胞比例、下调菏瘤鼠脾内免疫抑制细胞Treg比例。..本研究显示新构建病毒oHSV2-CADV具有直接溶瘤作用和肿瘤疫苗效果。新病毒既能直接杀伤肿瘤细胞治疗肿瘤，又能诱导特异性抗肿瘤免疫，二次杀伤肿瘤并治疗转移瘤和防止肿瘤复发。因此，oHSV2-CADV将具有较好的临床应用前景。..通过本项目研究，取得的科研成果：已发表3篇SCI论文（BMC Cancer、Plos One 及Oncotarget）和一篇核心期刊论文；已申报3项专利，其中两项已授权；目前与本课题有关的3名博士研究生和2名硕士研究生。