隔药饼灸抑制RhoA/Rock稳定动脉粥样硬化易损斑块机制的研究

To study the mechanism of vulnerability of atherosclerotic(AS) vulnerable plaques and enhance the stability of atherosclerotic plaques.RhoA / Rock plays an important role in signal transduction in the formation and development of AS. It may be a new target to stabilize vulnerable plaques. The previous work of our group also showed that moxibustion with medicine separated cake has a stable effect on atherosclerotic plaque. Therefore, the hypothesis is that the mechanism of moxibustion on stabilizing vulnerable plaque may be associated with RhoA/Rock signal pathway to protect vascular endothelial function. The regulation of macrophage autophagy and cholesterol reverse transport function was related. Based on the previous clinical and animal studies, this study was designed to use drug-separated cake moxibustion, as vulnerable plaque model rabbits as subjects, using radioimmunoassay and electron microscopy. Immunohistochemical techniques such as Western Blot and fluorescent quantitative PCR were used to elucidate the mechanism of drug separated moxibustion in stabilizing atherosclerotic plaques in terms of cell and molecular level, which protected vascular endothelial cells, smooth muscle cells and macrophages through RhoA/Rock signaling pathway.The regulation of macrophage autophagy and cholesterol reverse transport function provides experimental basis for the future clinical development of a new method to prevent and treat AS.

深入研究动脉粥样硬化(AS)血管斑块易损性的发生机制，增强易损斑块的稳定性，是预防临床急性心血管事件迫切解决的关键问题。研究表明，RhoA/Rock在AS的形成发展中起着重要的信号转导作用，可能是稳定易损斑块的新靶点。又本课题组前期工作显示隔药饼灸对AS易损斑块具有稳定性作用。因此提出假说：隔药饼灸稳定易损斑块的机理可能与RhoA/Rock信号通路保护血管内皮功能、调控巨噬细胞自噬及胆固醇逆转运功能相关。本研究拟在课题组以往临床、动物研究的基础上，采用隔药饼灸，以AS易损斑块模型兔为受试对象，运用放免检测、电镜技术、免疫组化、Western Blot和荧光定量PCR等技术，从细胞和分子水平阐述隔药饼灸稳定AS易损斑块的作用机理，是通过RhoA/Rock信号通路保护血管内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞，调控巨噬细胞自噬及胆固醇逆转运功能而实现的，为今后临床开发防治AS的新方法提供实验依据。

项目的背景.动脉粥样硬化(AS)是以血管壁内脂质、炎症细胞聚集为特征，急性冠脉综合征由于AS易损斑块(VAP)破裂和血栓形成造成急性冠脉闭塞所致，斑块易损性已成为国内外研究的热点。深入研究斑块易损性的发生机制，增强VAP的稳定性，是预防临床急性心血管事件的重要方法。Rho/Rock信号通路参与了AS发展的诸多过程，可能是稳定VAP的新靶点。.主要研究内容.（1）隔药饼灸对AS兔VAP模型血脂含量的影响。.（2）检测AS VAP超微结构；声学密度定量检测AS VAP内膜和中膜厚度及易损指数。.（3）研究隔药饼灸对兔AS VAP RhoA/Rock信号通路调控AS血管内皮功能的影响：.①血管内皮细胞：RhoA、Rock、NF-kB、TNF-α、MMP的表达。.②血管VSMC：RhoA、Rock、ERK、P38MAPK的表达。.③血管巨噬细胞：RhoA、Rock、VCAM-1、TLR4、NF-KB-P65的表达。.（4）研究隔药饼灸对兔AS VAP RhoA/Rock-PI3K/Akt/mTOR信号通路调控巨噬细胞自噬功能的影响。.（5）研究隔药饼灸对兔AS VAP RhoA/Rock与PPAR-γ-LXR-ABCA1信号通路调控胆固醇逆转运的影响。.重要结果.（1）隔药饼灸干预可降低AS兔血脂水平，通过改善 VAP内膜和中膜厚度及易损指数，可稳定 VAP超微结构。.（2）隔药饼灸可通过对兔AS血管内皮细胞、血管VSMC、血管巨噬细胞的调控作用，以延缓内膜增生，保护血管内皮功能，从而稳定易损斑块。.（3）隔药饼灸可通过对兔AS VAP调控巨噬细胞自噬功能，促进自噬体形成，增加细胞自噬功能，从而稳定易损斑块。.（4）隔药饼灸通过调控AS VAP胆固醇逆转运的作用，促进胆固醇逆转运，从而稳定易损斑块。.关键数据及其科学意义.该课题研究已发表论文11篇，获国家专利授权：发明专利2项、实用新型10项，培养研究生7名，课题负责人岳增辉获湖南省优秀科技工作者、湖南省中医药科技领军人才、国家一流专业针灸推拿学专业负责人等。.本课题从细胞和分子水平研究了隔药饼灸稳定AS VAP的作用机理，可能是通过隔药饼灸对兔AS VAP RhoA/Rock信号通路保护血管内皮功能（内皮细胞、VSMC及巨噬细胞）、调控巨噬细胞自噬及胆固醇逆转运功能而实现的。