E3（泛素连接酶）参与植物响应低磷胁迫的分子机制

磷是植物必需的大量元素之一，但土壤中磷浓度极低，一般低于10 uM，因此植物经常遭受低磷胁迫。我们已有的研究表明在正常条件下拟南芥中WRKY6抑制PHO1基因的表达，在磷胁迫时，WRKY6蛋白被降解从而解除对PHO1基因表达的抑制。使植物更好适应低磷胁迫。利用酵母双杂交技术筛选得到一个与WRKY6互作的E3（泛素连接酶）。构建E3基因的过量表达材料和敲除突变体后，首先在低磷胁迫条件下进行性状检测，发现E3基因过量表达材料表现较野生型耐低磷的表型；进一步的实验证明在E3基因过量表达材料中PHO1基因表达量较野生型高，而在E3基因敲除突变体中PHO1基因的表达量较野生型降低，推测E3基因可能参与WRKY6调控PHO1基因表达的这条通路中。后继实验还在进行中。

成功克隆拟南芥中的一个E3基因，通过转基因实验证明2个E3过量表达材料比野生型和突变体更加耐受低磷胁迫。Northern blot实验证明该基因受到低磷胁迫的诱导表达。利用Co-IP（免疫共沉淀）和BiFC（双分子荧光互补）技术，检测E3蛋白和WRKY6蛋白不互作。进行低磷（10uM）处理3天后的野生型、WRKY6过量表达和敲出突变体根部和叶片的总蛋白荧光差异凝胶电泳实验，其中发现有5个E3蛋白的表达量有变化，通过荧光实时定量PCR技术检测有3个基因受到低磷胁迫的诱导表达。