BSG基因遗传多态性对缺血性脑卒中易感性和预后的影响及机制研究

缺血性脑卒中（IS）是严重威胁人类健康的疾病，动脉粥样硬化（AS）是其最常见的病因。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN通过促进细胞外基质金属蛋白酶（MMP）的表达和血小板活化，参与AS的发生发展、斑块破裂及血栓形成，可能与IS的发生和预后密切相关。我们的前期预实验发现，EMMPRIN编码基因BSG的rs8259（A/T）多态性可增加报告基因的活性和IS的发病风险。本项目将通过进一步的病例对照研究和前瞻性研究，查明BSG的遗传多态性与IS发病风险的关系及对IS预后的影响；同时，在培养的外周血单个核细胞，研究BSG的单核苷酸多态性对单核细胞活化、BSG表达、MMP活性及组织因子（TF）表达的影响，初步探讨BSG多态性影响IS发病和预后的分子机制。本项目将首次阐明BSG在IS发病机制中的作用，查明BSG遗传多态性对IS易感性和预后的影响及分子机制，为IS的防治提供新的思路。

通过病例对照研究，连续收集湖南汉族缺血性脑卒中(IS)患者1360例以及正常对照组1200例，利用PCR-RFLP和ALDI-TOF-MS技术对BSG基因rs1803202、rs4919862、rs28915400、rs4919859、rs8637、rs6758、rs8259及MMP-9基因rs20544、rs1056628、rs1802908、rs2664517和 rs9509多态位点进行基因分型，分别比较不同基因型及等位基因频率与IS发病风险之间的关系。结果显示，缺血性脑卒中患者与正常对照人群中BSG rs8259 A/T多态位点基因型分布存在显著差异，表现为IS患者中rs8259 TT基因型的频率显著增高（p=0.005）；而在复发性IS患者中，rs8259 TA和TT基因型的频率均显著升高，且这两种基因型都可增加脑卒中再发的风险（p=0.041；p=0.033）；通过对dbSNP数据库中中国人群BSG基因SNP位点进行分析，发现该基因3'-UTR区的SNP rs8259位于miR-492结合部位，两个等位基因与miR-492的互补程度存在差别，进一步报告基因结果显示，rs8259T等位基因可明显升高报告基因的活性，以上结果表明，BSG rs8259多态可能是中国湖南地区汉族人群IS发生及复发的危险因素。MMP-9基因rs1056628位点基因型及等位基因频率分布在缺血性脑卒中患者与正常对照组间均存在统计学差异，ACI组中CC基因型和C等位基因频率均显著高于对照组（P＜0.05;P＜0.01），进一步通过构建报告基因质粒，并与pcDNA3.1-miR-491重组表达质粒共转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养，发现与野生型组比较， 突变型组重组质粒相对荧光素酶表达活性显著增高(P＜0.05)；MMP-9 mRNA在野生型和突变型两组中的表达水平无显著性差异（P＞0.05）；与野生型组相比较，rs1056628突变型组MMP-9蛋白表达水平明显增高(P＜0.01)。以上研究结果为深入阐明ACI的分子遗传学机制提供了新的理论依据，同时也可为缺血性脑卒中防治药物的开发提供了新的思路。