土家族民间药物排风藤保护神经细胞活性物质基础及资源品质研究

排风藤为茄科茄属植物千年不烂心Solanum cathayanum的干燥全草，为我国鄂西南和湘西土家族民间常用药物，资源十分丰富。药用全草，具有清热利湿、解毒消肿之功效。本课题组前期研究结果表明，排风藤富含生物碱类化合物，具有抗炎、保肝护肝和抗氧化活性，尤其是对过氧化氢损伤的神经细胞SH-SY5Y细胞系具有显著的保护作用，我们从排风藤水溶性生物碱部位分得2个具有典型简化石蒜碱类结构的化合物，其中1个为新生物碱结构。由于治疗退行性神经疾病的主要临床药物均为生物碱类结构，而其化学合成、自然资源和生物合成途径均难以获得合适的原料。本课题拟全面系统分离鉴定排风藤水溶性生物碱，评价其神经细胞保护活性，并探索其作用途径和机制，以期获得具有神经保护活性、结构简化的新型先导化合物，同时评价茄属植物中三种典型土家族民间药用植物的神经保护活性资源品质，为本属植物开发利用和寻找新型神经保护活性成分打下科学基础。

本课题从排风藤全草中分离获得40个单体化合物，其中有5个为新化合物。利用H2O2建立神经细胞氧化损伤模型，在此基础上研究排风藤提取物的神经保护作用，筛选出活性成分，并初步探索活性成分保护神经细胞对抗H2O2损伤的作用机制。结果表明，蕃茄碱能显著对抗H2O2对SH-SY5Y的细胞毒性，能显著降低Bax蛋白的表达量，抑制Caspase-3及Caspase-9蛋白的活化，并上调BDNF蛋白表达。该作用可能与其良好的抗氧化活性及抗凋亡活性有关。建立角叉菜胶致小鼠足肿胀炎症模型，观察排风藤各提取物对急性炎症的抑制效果；结果表明，排风藤正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物抗炎活性优于石油醚萃取物，可见正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物可能为排风藤主要抗炎活性部位。采用Griess试剂法和免疫细胞化学方法研究排风藤各提取物对脂多糖（LPS）刺激后巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的影响以及对环氧化酶-2（COX-2）表达的影响；结果表明，排风藤水溶性生物碱、叔胺生物碱、弱碱性生物碱、正丁醇萃取部位、化合物SCE-1对LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞生成NO浓度升高均有明显的抑制作用。以上各部位对LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞COX-2的表达均有明显的抑制作用。以CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型，测定排风藤活性部位对肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶（AST）活性及总胆红素（TBILI）含量的影响；结果表明，叔胺生物碱，正丁醇萃取物能降低小鼠血清ALT、AST活性及TBILI的含量，并且叔胺生物碱的效果比正丁醇萃取物的更好。通过小鼠离体肝细胞原代培养建立CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型，检测排风藤活性成分对肝细胞中ALT活性的影响；结果表明，正丁醇萃取物、叔胺生物碱与模型组比较小鼠肝细胞中ALT活性呈现降低趋势且降低的效果呈剂量依赖性，京尼平苷、8-羟基-3-甲氧基-5H-吡啶[2,1-c]并吡嗪-5-酮和脲基甲酸乙酯对小鼠肝细胞中ALT活性表现出良好的降低作用，而番茄碱无明显作用。建立排风藤干燥全草中番茄碱含量的RP-HPLC测定法，排风藤药材质量控制提供了可行的方法。采用有机合成手段合成三类吡啶类稠环化合物，以期发现高活性的IL-6抑制剂。合成的部分化合物具有较好的抗IL-6活性。