异丙酚处理内皮来源微囊泡通过lnc-CCT4-1靶向eIF4B减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤

Ischemia/reperfusion (I/R) can lead to myocardium cell injury induced by autophagy and apoptosis. Although the mechanism is remained unknown, our previous study observed the cardio-protective effect of endothelial derived microvesicles induced by propofol (Propofol-EMVs) in I/R stress. RNA sequencing showed that lnc-CCT4-1 was significantly increased in propofol-treated EMVs. Meanwhile, Bioinformatics analysis revealed that one of the target genes of lnc-CCT4-1, eIF4B, was an apoptosis-related gene indicating that lnc-CCT4-1 may be involved in the protective effect of propofol on myocardial I/R injury through eIF4B. With RNA sequencing, Gene transfection, Western blotting and other cell and molecular biological techniques, this project intends to observe the targeted regulating effect of Propofol-EMVs-carrying lnc-CCT4-1 on eIF4B in myocardial apoptosis and further reveal the corresponding mechnism, providing a new strategy for the clinical prevention and treatment of I/R.

缺血再灌注（I/R）可引起自噬和凋亡导致心肌细胞损伤，我们前期研究发现，I/R损伤的内皮细胞，在异丙酚刺激时能够释放具有心肌保护作用的微囊泡（propofol-EMVs），但机制不明。随后我们采用RNA sequence测序发现Propofol-EMVs内lnc-CCT4-1明显升高，而生物信息学分析发现lnc-CCT4-1其中一个靶基因eIF4B为凋亡相关基因，这些提示lnc-CCT4-1可能通过eIF4B参与异丙酚保护心肌IR损伤的过程。所以本项目拟采用RNA sequence、基因转染、WB等细胞和分子生物学技术，通过体内外观察Propofol-EMVs携带lnc-CCT4-1对凋亡关键基因eIF4B靶向调控及心肌细胞凋亡的影响，阐明Propofol-EMVs通过lnc-CCT4-1靶向eIF4B抑制细胞凋亡的新机制，为临床有效防治I/R提供新策略新方法。

缺血再灌注（IR）诱导冠状动脉内皮细胞（ECs）释放促凋亡介质，促进缺血再灌注损伤的心肌细胞凋亡。作为细胞间交流的媒介，内皮微囊泡（EMVs）在ECs激活或受伤时释放，随后将不同的信号传递给受体细胞并调节其功能。我们先前已证明，丙泊酚预处理减弱了缺氧/复氧（HR）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的损伤，这归因于丙泊酚预处理HUVECs衍生的EMVs对内皮细胞氧化应激的抑制。然而，目前还不清楚丙泊酚后处理HUVECs衍生的EMVs（（HR+P）-EMVs）是否具有心脏保护作用。在这项研究中，我们旨在研究相对于HR-EMVs，(HR+P)-EMVs对IR损伤的心肌细胞的作用，并阐明其基本机制。在缺氧-复氧（HR）细胞模型中，HR-EMVs加剧了AC16细胞的缺氧/复氧损伤，表现为氧化应激和细胞凋亡的增加，以及细胞活力的下降。心肌内注射HR-EMVs加剧了IR诱发的心脏损伤，表现为心脏氧化应激、细胞凋亡和梗死面积增加，以及心脏功能减弱。然而，体内和体外实验证实，与HR-EMVs相比，(HR+P)-EMVs在缺血再灌注心肌细胞中诱发的氧化应激和细胞凋亡的作用明显减弱。机制上，EMVs的RNA测序（EMVs-RNA-Seq）结果显示，与HR-EMVs相比，lncCCT4-2在（HR+P)-EMVs中明显增加。抑制lncCCT4-2后的(HR+P)-EMVs表现出与HR-EMVs类似的心肌细胞损伤作用。CCT4是lncCCT4-2的一个靶基因，在AC16细胞中敲除CCT4会增强(HR+P)-EMVs对缺氧/复氧心肌细胞的损伤作用。在AC16细胞中过表达CCT4可挽救沉默了lncCCT4-2的(HR+P)-EMV对缺氧/复氧心肌细胞带来的损伤作用。总之，丙泊酚后处理内皮细胞改变了HR-EMVs的内容物，并通过EMVs中的lncCCT4-2上调了心肌细胞中CCT4的表达，从而抑制了HR-EMVs诱导的心脏损伤。