WASp在异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒特异性T细胞免疫重建中的机制研究

造血干细胞移植后巨细胞病毒(CMV)感染有效控制有耐于CMV特异性T细胞(CMV-CTL)的良好重建,我们前期研究发现移植物中CMV-CTL亚群影响CTL免疫重建的质量和速度。近来发现参与细胞骨架运动和信号传递的WAS蛋白（WASp）在调节免疫细胞功能中起着关键作用，WASp可能参与CTL效应分子组装和细胞毒过程。本项目拟比较不同基因型WASp小鼠（野生型/缺陷型）T淋巴细胞(Th1/Th2/Th17/Treg）表型和功能差别，以及CMV-CTL各分化阶段转录因子T-bet/Eomes/Blimp-1/BCL-6的表达，阐明WASp在CTL分化成熟、发挥效应中的作用；并借助WASp基因缺陷小鼠骨髓移植和移植后CMV感染模型，连续监测移植后CMV-CTL重建，研究WASp动态表达对CMV发生率和移植生存期的影响，过继细胞免疫输注的治疗效果，以期提示WASp对CMV-CTL重建的影响和机制。

本课题通过建立WASp缺陷小鼠CMV急性感染模型和WASp基因缺陷小鼠骨髓移植模型，证实WASP参与CMV-CTL发挥抗病毒效应的过程，对移植后CMV-CTL重建具有免疫调节作用：1)腹腔注射MCMV 1×105 PFU建立成年WAS基因缺陷小鼠急性感染模型，肺为感染主要靶器官之一；2)初次感染后脾脏、外周血和肺脏中MCMV CTL比例及分布均无明显变化，但CD8+细胞亚群分化及在器官中的分布有明显差异，CD8+CD27-CD28- T细胞在实验组小鼠（WASp-/-）肺组织中所占比例明显低于感染对照组小鼠（WASp+/+）；3)WASp影响CD8+T细胞的活化从而导致CD8+T细胞功能的改变，WASp-/-小鼠CD8+ T淋巴细胞的IL-2/IFNγ/CD107a/Granzyme B的表达水平显著低于WASp+/+小鼠，WASp+/+小鼠CD8+ T淋巴细胞凋亡率显著低于WASp-/-小鼠；4)成功建立WASp基因缺陷小鼠骨髓移植模型，发现WAS+移植组小鼠体重在移植后第4天下降到最低点，后逐渐恢复，而WAS-移植组在移植后体重总体呈下降趋势，在移植后第1周各组小鼠WBC、PLT处于极度抑制期，自第2周起WBC、PLT数逐渐上升，并缓慢恢复至正常水平，造血重建成功；同时移植后WAS-移植组PLT数低于WAS+移植组，提示了WASp参与了血小板的重建；5)在移植后第2月WAS-移植组的CD8+T细胞明显高于WAS+移植组，与WAS-移植组CMV感染时间相符；6)另外，根据本自然科学基金课题，结合临床实践，将移植后CMV感染与白血病复发相联系，进行了Meta分析，发现在AML和CML患者移植后CMV感染可以降低早期复发风险。课题研究结果发表SCI论文1篇，核心期刊论文1篇，待发表文章4篇；欧洲骨髓移植年会Poster 1次。本研究的理论意义在于明确了WASP在CMV感染中免疫调节作用，证实WASP参与移植后CMV特异性CTL的重建过程，与移植后CMV感染的发生密切相关，为后续研究奠定理论依据。