鸡新型模式识别受体NLR的克隆、功能和信号途径的研究

NLR是胞浆型PRR中的一个重要家族成员,在机体固有免疫应答中发挥独特的功能,并与多种临床疾病有关，因此，NLR信号通路的研究已成为目前免疫学的研究热点。但是目前关于禽类NLR的研究尚未见报道，Genebank数据库中也只有根据基因组同源性分析得到的计算机预测序列。本研究拟对鸡体内的NLR基因序列进行克隆测序，分析NLR基因在鸡体内的时空表达多样性，并通过体内外实验，研究NLR基因的表达对鸡沙门氏菌等家禽常见细菌病的免疫保护作用和细胞信号传导机制。探讨NLR信号通路在这一过程中的作用，阐明家禽先天性免疫的分子机理，从而为在分子水平开展家禽疫苗免疫佐剂开发研究提供新的靶点。

本项目按照研究计划，已圆满的完成。首先根据已知的人、鼠和鱼等物种的基因序列，进行同源性分析，采用3’RACE和5’RACE技术成功克隆出清远麻鸡NOD1和NLRP3基因的全长序列，并登录至Genbank，登录号分别为JX465487.1和KJ470775。其次，首次在转录水平探讨了NOD1和NLRP3两基因在鸡各组织中的发育性表达变化情况，研究表明两基因在鸡体内广泛表达，并具有时空和组织表达差异，这为在鸡上深入开展NLR相关研究工作奠定了坚实的基础。再次，通过体内实验表明，NOD1信号通路在沙门氏菌感染后，表达量出现上调，NLRP3的表达量出现先下降后上升的变化，说明两基因可能在抗沙门氏菌感染过程中都发挥了一定作用。最后，体外实验表明，RIP2的表达水平随着NOD1基因表达水平的改变而改变，NF-kB未见这种变化，说明NOD1可能对RIP2的表达具有直接的调节作用，但对NF-kB可能没有直接调节作用。在NOD1被激活或抑制过程中，IL-8的表达水平也出现相应的上调或下调，但IL-1变化不明显，说明NOD1参与机体的免疫反应作用的发挥可能不通过炎性因子IL-1，而是通过IL-8或其他一些炎性因子。通过本项目的实施，克隆了鸡的NOD1和NLRP3基因，并初步探讨了NOD1和NLRP3基因在鸡抗病作用中的角色,以及NOD1的生物学功能,为阐明鸡NLR信号通路在鸡抗病过程中的作用起到了一定的推动作用。