从p38MAPK/iNOS通路研究制大黄-川芎药对抑制造影剂肾病肾小管上皮细胞凋亡的分子机制

难治性疾病CIN（造影剂肾病）主要表现为急性肾衰，肾小管上皮细胞凋亡是其主要机制。中医学认为急性肾衰时毒素潴留、毒壅气血、脉络不利，属"毒瘀互结"，应用解毒化瘀药对制大黄-川芎防治本病取得良好效果。第一申请人在国外做访问学者期间，在国际上首先报道p38MAPK/iNOS是本病凋亡机制的关键信号通路，但其靶转录因子尚未阐明。解毒化瘀中药能通过抑制p38MAPK活性发挥药理效应，推测药对防治CIN的分子机制与调节p38MAPK/iNOS通路有关。建立CIN肾小管上皮细胞凋亡经典体内、外模型，采用信号通路阻断剂、western、real-timePCR、 FACS等方法研究可能的靶转录因子FOXO1、PPAR-γ蛋白质和mRNA表达及药对对该通路的调节效应及量效关系，揭示药对防治本病分子机理，为CIN提供中医药防治途径和完整的信号通路。

随着介入治疗和造影检查的广泛应用，造影剂肾病 (contrast-induced nephropathy, CIN) 已成为世界性的卫生问题。目前对CIN确切发生机制尚未完全清楚，并且缺乏有效的防治药物。本项目立足前期基础，经过较为深入的研究，立足大鼠和细胞模型，进一步明确肾小管上皮细胞凋亡在CIN发病机制中扮演重要角色、p38 MAPK/iNOS通路激活是介导该细胞凋亡的重要途径，Bcl-2、Bax、Mcl-1等作为该通路的下游信号参与了这一过程。在本项目中，我们还首先发现FoxO1是活化的p38 MAPK/iNOS通路的靶转录因子，而另一转录因子PPAR-γ未参与该过程。除此之外，项目组还发现UGT 是比UNAG、Cystatin-C更敏感的诊断CIN的标志物，并在国际上首先报道。项目组同时发现高剂量制大黄-川芎药对水煎液显示出和抗氧化剂NAC相近的抑制造影剂急性肾损伤的效应、有效保护模型大鼠肾功能、减轻肾小管-间质病变和抑制肾小管上皮细胞凋亡。机制上，制大黄-川芎药对是通过抑制p38 MAPK/iNOS通路活化来发挥肾保护效应。上述发现为临床上运用“解毒化瘀”中医治法防治难治性疾病CIN提供了理论基础和实验室证据。